Protein-A/G純化柱

使用說明書

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

第1版（2016年04月修訂）

關(guān)聯(lián)信息

蛋白A（Staphylococcal Protein A）是一種金黃色葡萄球菌細胞壁蛋白質(zhì)，能與哺乳動物IgG的Fc區(qū)結(jié)合。采用重組表達的Protein A，將Protein A與溴化氫活化的顆粒狀瓊脂糖凝膠偶聯(lián)制成Protein A預裝柱，能夠特異性地結(jié)合多種免疫球蛋白的Fc區(qū)段。
  Protein A預裝柱可用來純化不同來源的抗體及不同亞型的抗體，并在免疫共沉淀實驗中捕獲免疫復合物。本產(chǎn)品使用了多位點交聯(lián)技術(shù)，穩(wěn)定性好、特異性高并具有廣譜結(jié)合力，每毫升基質(zhì)可特異性結(jié)合5-10毫克抗體。

產(chǎn)品組分

保存條件

經(jīng)常使用4℃保存，長期保存加甘油放置于-20℃，有效期一年。

運輸條件

低溫冷藏運輸

注意事項

抗體純化柱可以多次反復使用，但應當避免同一支純化柱純化不同的抗體，因為抗體和柱子之間結(jié)合緊密，酸洗脫并不能完全洗去結(jié)合上的免疫球蛋白，將產(chǎn)生交叉反應。

操作步驟

1、取Protein A柱平衡至室溫，用 10倍柱體積的PBS洗滌平衡層析柱；
  2、含抗體的血清或其它體液高速離心后，將上清與等體積2×PBS緩沖液混合，調(diào)整pH以及離子濃度后，緩慢加入層析柱；
  3、用10倍柱體積以上的PBS洗滌，至流出液無蛋白檢出；  
  4、加入2-5倍柱體積0.1 M檸檬酸（pH 2.7）或者0.1 M甘氨酸（pH 3.0），收集洗脫液；
  5、洗脫后的抗體加入飽和Na2HPO4溶液進行中和；
  6、濃縮洗脫液到所需體積，加入50%甘油-20℃保存；  
  7、層析柱中Protein
A柱使用后需要及時處理，酸洗脫抗體以后，使用10倍柱體積PBS洗柱平衡到中性，20%乙醇溶液充分洗滌后，封閉上下兩端，保存在4℃。