檢測范圍跨度大,加樣量少,靈敏度高,這就是化學發(fā)光試劑盒
1 原理
化學發(fā)光試劑盒(CLIA kit)采用 Streptavidin-HRP 及增強型的 ECL 發(fā)光體系作為發(fā) 光底物試劑來實現(xiàn)檢測過程的試劑盒。
將代測樣本加入到固相包被有抗體的黑色不透明微孔板 中,辣根過氧化物酶的結合物和抗體特異性結合。洗去未反應的 游離成分。加入魯米諾(Luminol)發(fā)光底液,并由光子計數(shù)器 讀出各孔的相對光度值(RLU),檢測原理見右圖。
化學發(fā)光檢測技術由于其靈敏度高,且不存在放射性污染而 被稱為最有前途的實驗室診斷方法之一。
2 特點
化學發(fā)光試劑盒的特點:
檢測范圍跨度大
CLIA 由于線性動力學范圍寬,就能同時解決由蛋白含量過高超出 ELISA 檢測范圍而需要對 樣本進行稀釋,而同時低濃度的樣本在稀釋后信號檢測不到的問題。如人 C 反應蛋白是一 種急性期蛋白,其含量在不同狀態(tài)有數(shù)百倍的變化,使用優(yōu)爾生 CLIA Kit for C Reactive Protein ,Human (SCA821Hu ) 對于各種含量的樣本可以直接進行相同稀釋倍數(shù)檢測。
加樣量少;對應一些很難獲得的樣本,如一些小鼠的尿液樣本獲得非常困難,優(yōu)爾生發(fā)光試 劑盒針對這樣的指標,樣本加樣量可為 50ul,極大的節(jié)約了用戶的樣本。
靈敏度高,某些樣本代測物種含量很低,如檢測人絨毛膜促性腺激素(hcG)極低含量樣本使 用 ELISA 檢測試劑盒很難檢測出來。使用 CLIA Kit for Chorionic Gonadotropin (CG), SCD216Hu,最低檢測限可到 2.35pg/ml,見下面的例子。
3、HCG 為例用兩種試劑盒檢測樣本數(shù)據(jù) 為例用兩種試劑盒檢測樣本數(shù)據(jù) 為例用兩種試劑盒檢測樣本數(shù)據(jù)
從數(shù)據(jù)中可以發(fā)現(xiàn)樣本在 huO2,huO3 使用 ELISA 檢測試劑盒的時候,測值僅為 0.160,, 0.170 不落在標準曲線范圍內。
而使用 CLIA Kit 進行檢測,huO2,huO3 這兩個樣本測值(RLU),分別為 465,497 落在標準曲線中,可以計算出濃度為別為:13.55pg/mL 和 19.19pg/mL。
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