His-tag標(biāo)簽單克隆抗體-重組蛋白檢測(cè)的好幫手
通過(guò)重組技術(shù)獲取目的蛋白是目前應(yīng)用最廣泛的生物技術(shù)之一,目的蛋白的純化是重組 技術(shù)中最關(guān)鍵也是最難的一步,純化的好壞決定了目的蛋白的優(yōu)劣。目前常規(guī)方法是使用目 的蛋白和一個(gè)親和純化標(biāo)簽(Tag)融合表達(dá),通過(guò)親和純化標(biāo)簽蛋白來(lái)純化目的蛋白。
同時(shí),如何檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)也是生物工作者面臨的一大問(wèn)題,針對(duì)不同的目的蛋白 運(yùn)用不同的目的蛋白特異性抗體顯然太復(fù)雜且成本太高,有時(shí)甚至在市場(chǎng)上根本找不到和實(shí) 驗(yàn)者相匹配的特異性抗體。如果我們選擇針對(duì)標(biāo)簽蛋白的特異性抗體則不僅解決了檢測(cè)這個(gè) 難題,而且這個(gè)抗標(biāo)簽的單抗就相當(dāng)于我們平時(shí)所使用的“二抗”,也就是說(shuō),對(duì)于任何使 用了同一個(gè)標(biāo)簽蛋白的目的蛋白都可以檢測(cè)了,因此,抗標(biāo)簽蛋白的抗體對(duì)于基因工程工作 者是一個(gè)非常實(shí)用的目的蛋白檢測(cè)工具。
常用的 Tag 包括 Myc、HA、Flag、His、Gst 等,其中 His 是最常使用的。而 His-Tag(HHHHHH),這個(gè)只有 6 個(gè)組氨酸的標(biāo)簽在 pH8.0 時(shí)不帶電,很小,幾乎沒(méi)有什么 免疫原性,因此,它的抗體,包括多抗和單抗,制備是非常難的,以至于在市面上很難找到 好的抗 His 標(biāo)簽的抗體,就算有,也是國(guó)外進(jìn)口且很貴。
優(yōu)爾生公司嘗試過(guò)很多傳統(tǒng)方法制備 His 單抗均未成功,終于在使用自主研發(fā)的特殊方 法后,成功制備出抗 His-tag 小鼠單克隆抗體(Monoclonal Antibody to Hexa Histidine-Tag (H6), MAX656Ge21)。經(jīng)檢測(cè),其特異性好,性質(zhì)穩(wěn)定,完全可以運(yùn)用于所有帶 His-Tag 的不同目 的蛋白的檢測(cè)。
His-tag 抗體可用于檢測(cè)與 His-tag 融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位,以及純化、定性 或定量檢測(cè) His-tag 融合表達(dá)蛋白等。本抗體可以檢測(cè)位于融合蛋白 N-terminal 的 His-tag, 也可以檢測(cè)位于融合蛋白 C-terminal 的 His-tag。目前,優(yōu)爾生公司自主研制的其他標(biāo)簽蛋白 的抗體還有 GST 標(biāo)簽蛋白抗體等。