NF-κB（Nuclear Factor Kappa B）是一種轉(zhuǎn)錄因子，可通過(guò)不同的內(nèi)外細(xì)胞 刺激，如細(xì)胞因子，無(wú)氧化劑自由基，紫外照射，細(xì)菌和病毒產(chǎn)品等激活。激 活后的 NF-κB 進(jìn)入細(xì)胞核，激活生物學(xué)功能基因的廣泛表達(dá)，已知在不同類型 的細(xì)胞中，在一定情況下超過(guò) 200 種基因以 NF-κB 為靶標(biāo)。此外，NF-κB 對(duì)免 疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)，增殖，遷移，以及細(xì)胞凋亡都起重要作用。且越來(lái) 越多的現(xiàn)象表明 NF-kB 在腫瘤形成過(guò)程中扮演重要角色。已在許多人類的惡性 腫瘤中檢測(cè)到 NF-kB 異常表達(dá)。近年來(lái)，許多研究都已集中在論證 NF-kB 激活 對(duì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的功能性影響，NF-kB 已成為癌癥治療的重要靶標(biāo)。

Cloud-Clone Corp.公司針對(duì)這一研究熱點(diǎn)，開(kāi)發(fā)了一系列 NF-κB 的重組蛋 白和抗體以及 ELISA 定量檢測(cè)試劑盒。NF-κB 相關(guān)產(chǎn)品的研制及面市，為廣大 科研人員提供了系統(tǒng)的 NF-κB 研究工具體系。

下面簡(jiǎn)要介紹一下 NF-κB 相關(guān)產(chǎn)品的技術(shù)開(kāi)發(fā)過(guò)程。

首先，將 NF-κB 基因擴(kuò)增且雙酶切后與 Cloud-Clone Corp.公司自主構(gòu)建的 大腸桿菌表達(dá)載體 pUSCNK-1 進(jìn)行連接。轉(zhuǎn)化后經(jīng)測(cè)序比對(duì)確定正確性后，將 表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，并經(jīng) IPTG 誘導(dǎo)表達(dá)，因表達(dá)蛋白含有 His 標(biāo)簽，采 用鎳柱純化，獲得不同種屬的 NF-κB 重組蛋白（RPB824Hu01, RPB824Hu02,  RPB824Mu01, RPB824Ra01, RPB824Ga01），并做 SDS-PAGE 驗(yàn)證蛋白的分子量 以及純度。圖 2 是 RPB824Hu02 的 SDS-PAGE 驗(yàn)證圖。

其次，分別用重組蛋白免疫小鼠，純化后制備出小鼠抗人（MAB824Hu22）， 小鼠抗大鼠（MAB824Ra21），小鼠抗雞（MAB824Ga21）的 NF-κB 高特異性單 克隆抗體。

最后，用不同種屬重組蛋白免疫家兔，獲得兔抗人（PAB824Hu01, PAB824Hu02），兔抗小鼠（PAB824Mu01），兔抗大鼠（PAB824Ra01）和兔抗雞 （PAB824Ga01）的 NF-κB 多克隆抗體。將獲得的多克隆抗體與生物素偶聯(lián)得到 (PAB824Hu71, PAB824Mu71) 偶聯(lián)抗體。將獲得的多克隆抗體與 FITC 偶聯(lián)得到 (PAB824Hu81, PAB824Mu81)。這些抗體都通過(guò)了 Western Blot 和 IHC 等方法 的驗(yàn)證。用 PAB824Hu01 對(duì)血清樣本進(jìn)行 WB 檢測(cè)，結(jié)果如圖 3 所示。用人心 臟組織進(jìn)行 IHC 檢測(cè)結(jié)果展示于圖 4 中，結(jié)果顯示在人心臟組織中該蛋白主要 集中表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核中。

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