gABA（Gamma-Aminobutyric Acid）是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要的抑制性 神經(jīng)遞質(zhì)，主要作用是通過神經(jīng)系統(tǒng)減少神經(jīng)元興奮性。gABA 在人體中可直接 調(diào)節(jié)肌肉緊張度及其他功能，當(dāng)缺乏 gABA 時，人體會感覺焦慮和疲累，所以 gABA 的含量對人體的正常的生理機能起到重要的作用。 

gABA 是一種天然存在的非蛋白質(zhì)氨基酸，在各個物種的分子量一樣， Cloud-Clone Corp.針對這一特點，開發(fā)了一系列偶聯(lián)載體的 gABA 分子以及針對 gABA 的特異性抗體和 gABA 的定量檢測試劑盒。gABA 產(chǎn)品的研制及面市，為 廣大科研人員提供了系統(tǒng)的 gABA 研究工具體系。 

1. gABA 偶聯(lián)改造 

gABA 分子量小，需要偶聯(lián)載體進行改造才能成為具有免疫原性的抗原。 Cloud-Clone Corp. 采用戊二醛法將 gABA 分別偶聯(lián)了 BSA、OVA、HSA，得到 BSA Conjugated gABA（CPA900Ge11）、OVA Conjugated gABA （CPA900Ge21） 和 HSA Conjugated gABA（CPA900Ge41）?；具^程是取該分子和載體蛋白， 在 PBS 中溶解，加入戊二醛，室溫反應(yīng)1h，用 G-100柱分離，得到完全抗原。 原理如下：

圖2 gABA 偶聯(lián)反應(yīng)原理

2. gABA 抗體的制備以及偶聯(lián) 

以偶聯(lián) OVA-gABA 為抗原，免疫兔獲得抗血清后，通過純化和篩選得到抗 gABA 特異性的多抗（PAA900Ge01）。 

在該抗體上標(biāo)記生物素（biotin），獲得 biotin 標(biāo)記的抗 gABA 多抗 （PAA900Ge71）；標(biāo)記 FITC，獲得 FITC 標(biāo)記的抗 gABA 多抗（PAA900Ge81）。

生物素標(biāo)記方法： 

生物素分子有兩個環(huán)狀結(jié)構(gòu)（如圖3），噻吩環(huán)上戊酸側(cè)鏈末端羧基是結(jié)合 抗體和其他生物大分子的位點。生物素經(jīng)過化學(xué)修飾變成帶有活性基團的衍生 物——活化生物素，在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導(dǎo)下，可與生物大分子偶聯(lián)，包括蛋 白質(zhì)，核酸，多糖，脂類等。 

將 gABA 用碳酸鹽緩沖液溶解，按摩爾比1:1的比例加入活化了的生物素酯， 混勻，37℃過夜，之后用低分子量透析袋，透除（用0.01M PBS）未結(jié)合的 r-GABA， 濃縮，收集，分裝凍干。 

FITC 標(biāo)記方法：

堿性條件下，F(xiàn)ITC的硫碳銨鍵與蛋白質(zhì)上的賴氨酸的γ氨基反應(yīng)，得到FITC 標(biāo)記的熒光復(fù)合物?；驹砣缦拢?nbsp;

FITC-N=C=S +N-H2-蛋白質(zhì)                             FITC-NS-C-N-H2-蛋白質(zhì)

Cloud-Clone Corp. 采用的是 Marsshall 法進行標(biāo)記。 

3. gABA 試劑盒的生產(chǎn) 

在 gABA 偶聯(lián)載體分子及其抗體研制成功的基礎(chǔ)上，Cloud-Clone Corp.還研 發(fā)了 gABA 定量檢測試劑盒（CEA900Ge）。由于 gABA 是一個小分子，且在不 同物種中以相同形式存在，所以抗體和試劑盒可應(yīng)用于不同物種的 gABA 檢測。 

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