Toll 樣受體 4（Toll-like receptor 4，TLR4）是由 Poltorak 等于 1998 年發(fā)現(xiàn)的 一種 I 型跨膜蛋白，其由 TLR4 基因編碼，并表達(dá)于包括單核細(xì)胞，巨嗜細(xì)胞在內(nèi) 的多種組織細(xì)胞中，可以識別革蘭氏陰性細(xì)菌的脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）， 并通過 NF-κB 或 JNK/SAPK 途徑啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)（圖 1）（對 LPS 及其檢 測產(chǎn)品的相關(guān)介紹請見 http://www.uscnk.com/topic/LPS-ELISA-Kit-may-Substitutefor-LAL-Test.html）。

天然免疫（又稱固有免疫）是指生物在種系進(jìn)化發(fā)育過程中逐漸形成的免疫方 式，它在個(gè)體出生時(shí)即具備，不針對特定抗原且具有廣泛的作用范圍。天然免疫在 機(jī)體防御機(jī)制中具有重要意義，其可以作為防御致病微生物感染的第一道防線。研 究顯示，TLR4 能通過直接識別包括 LPS，脂磷壁酸（lipoteichoic acid，LTA），dsRNA 等在內(nèi)的病原相關(guān)分子模式（pathogen associated molecular pattern，PAMP）而在激 活天然免疫過程中起到關(guān)鍵作用。近年來，該分子在引起炎癥反應(yīng)，抗病毒感染， 腫瘤治療和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答等過程中的作用均得到了一定的研究。

常見的關(guān)于 TLR4 的研究包括體外和體內(nèi)模型，而動(dòng)物體內(nèi)模型的研究多基 于小鼠模型，所以在小鼠的 TLR4 相關(guān)檢測試劑方面，本公司進(jìn)行了大量的研發(fā) 工作，并推出了多種產(chǎn)品，例如：重組蛋白 RPA753Mu01，該蛋白序列的選擇 來自于對全長蛋白的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)分析和抗原表位分析，最后選定了包含 Asn26~Glu269 氨基酸的胞外區(qū)片段作為重組蛋白的表達(dá)序列，具體序列信息見 圖 2。 該重組蛋白的 SDS-PAGE 鑒定圖見圖 3。

MHHHHHHSSGLVPRGSGMKETAAAKFERQHMDSPDLGTDDDDKAMADIGSEF-NPCIE VPNITYQCM DQKLSKVPDD IPSSTKNIDL SFNPLKILKS YSFSNFSELQ WLDLSRCEIE TIEDKAWHGL HHLSNLILTG NPIQSFSPGS FSGLTSLENL VAVETKLASL ESFPIGQLIT LKKLNVAHNF IHSCKLPAYF SNLTNLVHVD LSYNYIQTIT VNDLQFLREN PQVNLSLDMS LNPIDFIQDQ AFQGIKLHEL TLRGNFNSSN IMKTCLQNLA GLHVHRLILG EFKDERNLE

圖 2 RPA753Mu01 序列信息

此后用該蛋白免疫兔，在獲得抗血清后通過抗原特異性的親和層析得到高 濃度和高純度的抗體 PAA753Mu01，其 Western Blot 及 IHC 鑒定圖見圖 4 及圖 5。 同時(shí)，對于該抗體進(jìn)行各種標(biāo)記物偶聯(lián)，得到生物素、FITC 等標(biāo)記的抗小鼠 TLR4 多克隆抗體（PAA753Mu71，PAA753Mu81）。

小鼠 TLR4 蛋白的物種來源是小鼠，而由于種屬免疫特性的局限，制備該蛋 白的單克隆抗體不能使用小鼠作為免疫動(dòng)物，基于這一點(diǎn)，本公司應(yīng)用正在展 開的科研課題“大鼠單克隆抗體研發(fā)”，以大鼠作為免疫動(dòng)物制備該蛋白的單 克隆抗體，產(chǎn)品正在研發(fā)中，請持續(xù)關(guān)注。

針對人的 TLR4 蛋白，本公司研發(fā)的重組蛋白 RPA753Hu01 包含的氨基酸 為 Phe326~Ile634，且用該蛋白不僅制備了多克隆抗體 PAA753Hu01 還制備了高 特異性的單克隆抗體 MAA753Hu22，其已被用于 WB、IHC 和 ELISA 等多項(xiàng)實(shí) 驗(yàn)中。

此外，各物種的 TLR4 蛋白定量檢測試劑盒 SEA753Hu，SEA753Mu， SEA753Ra 等已被用于多個(gè)研究項(xiàng)目中，發(fā)表的文獻(xiàn)具體情況如表 1。

表 1 TLR4 相關(guān)檢測試劑盒發(fā)表文獻(xiàn)