轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β)屬于一組新近發(fā)現(xiàn)的調(diào) 節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的 TGF-β超家族，廣泛存在于動(dòng)物正常組織細(xì)胞核轉(zhuǎn)化細(xì)胞 中，具有促進(jìn)胚胎發(fā)育、調(diào)節(jié)免疫、生長(zhǎng)抑制、創(chuàng)傷修復(fù)、促進(jìn)血管生成和細(xì) 胞外基質(zhì)沉淀等功能。由于這種細(xì)胞因子可促使正常的成纖維細(xì)胞的表型發(fā)生 轉(zhuǎn)化，協(xié)同表皮生長(zhǎng)因子，改變成纖維細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)特性，從貼壁依賴性生長(zhǎng) 轉(zhuǎn)變?yōu)橘N壁非依賴性生長(zhǎng)的一類物質(zhì)，故得以命名。

哺乳動(dòng)物中目前發(fā)現(xiàn)有 3 種 TGF-β，分別為 TGF-β1、TGF-β2 和 TGF-β3。 它們分別位于不同的染色體上，其氨基酸序列之間有 70-80%的同源性。三種 TGF-β中，TGF-β1 在體細(xì)胞系中所占比例最高(>90% )，活性最強(qiáng)。TGF-β1 可 由巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和軟骨細(xì)胞產(chǎn)生，也可由白血病細(xì)胞產(chǎn)生， 主要分布于人血小板和哺乳動(dòng)物骨中；TGF-β2 可由角化細(xì)胞、顆粒層細(xì)胞和神 經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞產(chǎn)生；TGF-β3 以間充質(zhì)起源的細(xì)胞產(chǎn)生為主。

機(jī)體內(nèi)細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的 TGF-β為非活性同型二聚體的前體分子。合成后， TGF-β同型二聚體與延遲相關(guān)肽（Latency Associated Peptide, LAP）（轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因 子β N 端皆具有一個(gè)長(zhǎng) 20~30 個(gè)氨基酸序列）形成的復(fù)合稱為小潛伏復(fù)合物 （Small Latent Complex, SLC）。在細(xì)胞內(nèi)，SLC 與 TGF-β結(jié)合蛋白（Latent TGF-β-Binding Protein, LTBP）結(jié)合形成了復(fù)雜的大潛在復(fù)合物（Large Latent Complex, LLC）。TGF-β以 LLC 的形式由細(xì)胞分泌到細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ECM）。也就是說(shuō)在血清血漿等生物樣本中，大多數(shù) TGF-β是以 LLC 的 形式存在，由于本試劑盒中的抗體是特異性地識(shí)別游離的 TGF-β，要達(dá)到定量 檢測(cè)生物樣本中的 TGF-β的目的，需要將樣本作前處理釋放 TGF-β，即是 TGF-β 與結(jié)合蛋白解離成游離的 TGF-β蛋白。具體的操作方法如下：

[樣本前處理步驟]

1、 血清/血漿

1） 取 50μL 樣本，加入 10μL 1N HCl，混勻。

2） 室溫靜置 10min。

3） 加入 10μL 1.2N NaOH/0.5M HEPES，混勻。

4） 加入 80μL 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，混勻后即可檢測(cè)（2h 內(nèi)檢測(cè)）。

5） 計(jì)算結(jié)果時(shí)應(yīng)乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)（3）。

2、 細(xì)胞培養(yǎng)上清

1） 取 100μL 細(xì)胞培養(yǎng)上清，加入 20μL 1N HCl，混勻。

2） 室溫靜置 10min。

3） 加入 20μL 1.2N NaOH/0.5M HEPES，混勻后即可檢測(cè)（2h 內(nèi)檢測(cè)）。

4） 計(jì)算結(jié)果時(shí)應(yīng)乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)（1.4）。

以人 TGF-β1 定量檢測(cè)試劑盒 SEA124Hu 為例, 我們對(duì)比血清樣本處理前和 處理后的測(cè)值。發(fā)現(xiàn)前處理后，LLC(TGF-β1 與 LAP 及 LTBP 的結(jié)合蛋白)解離 成游離的 TGF-β1 蛋白，樣本測(cè)值有明顯地升高。結(jié)果如圖 1。直接檢測(cè)未經(jīng)處 理的樣本，則無(wú)法準(zhǔn)確顯示血清血漿樣本中 TGF-β1 的含量。也就是說(shuō)，為準(zhǔn)確 檢測(cè)生物樣本中的 TGF-β1，建議先將樣本作前處理。

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β系列產(chǎn)品及發(fā)表文獻(xiàn)信息如下，敬請(qǐng)關(guān)注。