競爭抑制ELISA對(duì)小分子定量檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)
通常意義上來說,小分子是指分子量很小的化合物,一般分子量小于 1000 道爾頓(Dalton,Da)。在生物學(xué)領(lǐng)域,常見的小分子包括:多肽、多糖、氨基 酸、核苷酸等;其中也包括食品安全中涉及的“瘦肉精”、“三聚氰胺”等; 以及醫(yī)學(xué)檢測(cè)中的激素等。
由于小分子通?;瘜W(xué)組分單一,化學(xué)結(jié)構(gòu)簡單且分子量小,所以不具備免 疫原的基本化學(xué)特性。因此,小分子直接免疫動(dòng)物是不能激發(fā)免疫應(yīng)答而獲得 特異性抗體的,常用的免疫學(xué)檢測(cè)方法也很難對(duì)其進(jìn)行定量檢測(cè)?,F(xiàn)有的針對(duì) 小分子定量檢測(cè)的方法主要為高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC),但是該方法對(duì)儀器設(shè)備及樣本性質(zhì)要求高,檢測(cè)耗 時(shí)較長,因此在一定程度上限制了小分子檢測(cè)的發(fā)展。
正由于市場需求與現(xiàn)有檢測(cè)方法的限制性不能達(dá)到統(tǒng)一,所以針對(duì)小分子 的檢測(cè),我公司基于特有的小分子結(jié)構(gòu)改造及偶聯(lián)技術(shù),研發(fā)了一系列的 ELISA 檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品。我們首先通過對(duì)小分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,然后針對(duì)性地對(duì)其進(jìn) 行修飾并與特定的蛋白或多糖載體偶聯(lián),以獲取具有免疫原性的完全抗原,此 后再用該抗原免疫動(dòng)物制備并篩選特異性抗體。由于小分子結(jié)構(gòu)簡單,分子量 小,不具有兩個(gè)抗原識(shí)別位點(diǎn),因此不能被兩種抗體同時(shí)識(shí)別,所以在建立 ELISA 方法的時(shí)候很難使用雙抗體夾心法。我們?cè)讷@得小分子偶聯(lián)物和特異性 抗體后,選用了競爭抑制法來建立 ELISA 的檢測(cè)。
ELISA 檢測(cè)法每次實(shí)驗(yàn)耗時(shí)約 2.5 小時(shí),如果每次實(shí)驗(yàn)使用一個(gè) 96 孔酶標(biāo) 板,除去標(biāo)準(zhǔn)曲線使用的 6 個(gè)孔,剩余 90 孔均可用于樣本檢測(cè),所以對(duì)于每個(gè) 樣本的檢測(cè)僅需要不到 2 分鐘。對(duì)小分子的定量檢測(cè),ELISA 檢測(cè)法與常用的 HPLC 檢測(cè)比較,其優(yōu)勢(shì)見下表。
表 1. HPLC 與 ELISA 定量檢測(cè)小分子對(duì)比
項(xiàng)目 | HPLC | ELISA |
樣本體積 | 10-100ul | 50ul |
樣本性質(zhì) | 高 | 中 |
實(shí)驗(yàn)時(shí)間/樣本 | 30min | < 2min |
樣本數(shù)量 | 每管 1 個(gè)樣本 | 每塊板 90 個(gè)樣本 |
儀器價(jià)格 | 高 | 中 |
檢測(cè)價(jià)格 | 單個(gè)樣品所需費(fèi)用高 | 單個(gè)樣品所需費(fèi)用低 |
我公司研發(fā)的小分子類檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品涉及多個(gè)學(xué)科,包含:醫(yī)學(xué)激素類 產(chǎn)品,例如:雌酮(CEB003Ge)、睪酮(CEA458Ge)等;生物學(xué)氨基酸、維 生素類產(chǎn)品,例如:精氨酸(CEB938Ge)、維生素 B1(CED053Ge)等,微生 物學(xué)相關(guān)產(chǎn)品,例如:脂多糖(CEB526Ge)等;植物類相關(guān)產(chǎn)品,例如:脫落 酸(CEB218Ge)等。
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