Elisa 是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對于 Elisa 實驗的成功有著舉足輕重的作用。樣本收集的時間、處理方法和保存都會 影響到 Elisa 實驗的結(jié)果。上節(jié)我們介紹了血液（血清、血漿），組織勻漿、細 胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清等常見樣本的處理方法，這一節(jié)我們將會介紹皮膚組 織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰 道分泌物等特殊樣本的處理方法，供研究者參考。

1、痰液

1）選擇痰液中較為粘稠部分稱重，加兩倍于痰量的 0.1% DTT(二硫蘇糖醇)， DTT 的主要作用是溶解粘液，用吸管反復(fù)吹打，漩渦器振蕩 15s，37 度恒溫水 浴振蕩 5 分鐘；

2）加入兩倍于痰量的 PBS 緩沖液繼續(xù)振蕩 15-20 分鐘，150 目的金屬絲網(wǎng) 過濾，1500 rpm 離心 10 分鐘吸取上清液檢測。

2、糞便

盡量采集干的糞便，糞便過稀會較難處理且降低檢測的準(zhǔn)確性。采集的重 量應(yīng)大于 50 mg，將糞便用 PBS 洗 3 次（最終糞便質(zhì)量：PBS 體積=1:9），用超 聲粉碎（或搗碎）后于 5000×g 離心 10 分鐘，取上清檢測。

3、唾液

將樣品收集于離心管后在-70 度冰凍 1 小時。在冰上融化樣品后，2000×g 離 心 10 分鐘，取上清檢測。

4、 精漿

將精液收集于無菌容器中，正常精液射出體外呈稠厚的膠凍狀，射出體外 后需在室溫或 37 度水浴箱中使其在前列腺分泌的纖維蛋白溶解酶的作用下液 化，變的稀薄。待精液完全液化后，將精液 4000 rpm 離心 10 分鐘分離精漿進 行檢測。

5、 皮膚組織

用勻漿機加冰的 PBS 研磨 20-50 mg 的皮膚組織使其充分溶解，離心 20 分 鐘，10000 g/分鐘，取上清檢測。

6、 牛乳

于 4 度，12000g／分鐘離心 30 分鐘，去除上層脂肪，以及下層沉淀，取中 間層樣本用于檢測。

7、 腦脊液、肺泡灌洗液

樣本收集后于 1000×g 離心 20 分鐘，離心后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20 度，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。

處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故 該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融， 樣本處理之后可分裝密封保存，4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過 1 個月， -80 度不應(yīng)超過 2 個月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。 樣本的處理是實驗成功的第一步，以上就是關(guān)于 Elisa 特殊樣本處理方法的簡述， 供研究者參考。

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