常見免疫檢測的抗體標(biāo)記種類
標(biāo)記抗體是免疫電鏡樣品制備的一種常見方法,該技術(shù)由于操作簡單、靈敏度高,常應(yīng)用于IHC,WB,ICC,ELISA等實驗。通過標(biāo)記物的增強(qiáng)放大效應(yīng)來定位分析抗原,是目前市面上理想的快速價廉的定量檢測方法。
抗體標(biāo)記主要有酶標(biāo)記、熒光素標(biāo)記、同位素標(biāo)記、生物素標(biāo)記等,還有一些其他的標(biāo)記方法例如膠體金標(biāo)記,下面具體來展示云克隆公司研發(fā)的抗體標(biāo)記種類:
1、辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記,HRP標(biāo)記單抗和多抗的常用方法是過碘酸鈉法。其原理是HRP的糖基被氧化成醛基,隨后與抗體蛋白的氨基結(jié)合,形成Schiff堿。常用的HRP的底物有鄰苯二胺(OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和ABTS等,其中TMB是最常用于 WB、ELISA等實驗的底物顯色試劑,經(jīng)HRP作用后由無色變藍(lán)色,目測對比鮮明;加酸停止酶反應(yīng)后變黃色,可在比色計中定量。云克隆公司ELISA試劑盒中的檢測試劑B即為HRP標(biāo)記的抗體,再與TMB顯色底物反應(yīng)用于定量檢測。
2、異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記,F(xiàn)ITC是最常用的熒光素,其原理是在堿性條件下,F(xiàn)ITC 的異硫氰基能與IgG的自由氨基結(jié)合,形成IgG與熒光素的結(jié)合物,該熒光被捕捉后即可被檢測到,目前市面上這種標(biāo)記抗體大多被選擇作為熒光二抗,可用于免疫組織化學(xué)單染或多重染色。通過熒光顯微鏡或者流式細(xì)胞儀分析可對相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量的檢測。
3、生物素(Biotin)標(biāo)記,現(xiàn)在應(yīng)用廣泛的是生物素-親合素系統(tǒng),生物素與親和素之間高親和力的牢固結(jié)合以及級聯(lián)放大效應(yīng),標(biāo)記蛋白質(zhì)這類大分子,再通過顯色系統(tǒng)可以定量或者半定量地進(jìn)行抗原分析。
4、膠體金標(biāo)記(GICT),蛋白質(zhì)可與膠體金顆粒通過靜電結(jié)合從而被吸附到其表面,由于膠體金顆粒具有高電子密度的特性,在金標(biāo)蛋白結(jié)合處,在顯微鏡下可見黑褐色顆粒。由于檢測結(jié)果直接可以用顏色顯示,肉眼判斷容易,無需儀器設(shè)備,特別適合廣大基層單位、醫(yī)院、野外作業(yè)者以及偏遠(yuǎn)地區(qū)等應(yīng)用。該標(biāo)記技術(shù)已納入公司的研發(fā)項目,廣大的科研工作者很快就能獲得此類的標(biāo)記抗體。
5、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記,使用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗體,常用的標(biāo)記發(fā)光劑是魯米諾類,采用增強(qiáng)型的ECL發(fā)光體系作為發(fā)光底物試劑來實現(xiàn)標(biāo)記檢測,云克隆公司的化學(xué)發(fā)光試劑盒即采用這一標(biāo)記技術(shù),用于定量檢測相關(guān)蛋白等物質(zhì)。
云克隆公司多年致力于研發(fā)抗原抗體,有成熟的抗體標(biāo)記技術(shù),科研工作者可以從云克隆購買到各類標(biāo)記抗體,下面簡要列舉一些常見的標(biāo)記抗體。
Type | Catalog No. | Product | Applicaation |
HRP | MAA567Hu92 MAD063Hu92 | HRP-Linked Antibody to S100 Calcium Binding Protein B (S100B) HRP-Linked Antibody to Heat Shock 70kDa Protein 8 (HSPA8) | IHC;WB;ELISA |
FITC | PAA896Bo81 PAA384Hu81 PAE912Hu81 PAC109Hu81 PAD063Hu81 | FITC-Linked Antibody to Cystatin 3 (CST3) FITC-Linked Antibody to Interleukin 23 (IL23) FITC-Linked Antibody to Sirtuin 1 (SIRT1) FITC-Linked Antibody to Growth Differentiation Factor 3 (GDF3) FITC-Linked Antibody to Heat Shock 70kDa Protein 8 (HSPA8) | IHC;ICC;IF;WB |
Biotin | PAD063Hu71 PAA896Ga71 PAA384Hu71 PAA544Hu71 | Biotin-Linked Antibody to Heat Shock 70kDa Protein 8 (HSPA8) Biotin-Linked Antibody to Cystatin 3 (CST3) Biotin-Linked Antibody to Interleukin 23 (IL23) Biotin-Linked Antibody to Immunoglobulin G (IgG) | IHC;WB;ELISA |