在傳統(tǒng)的分子克隆中，我們經(jīng)常通過PCR技術(shù)擴(kuò)增得到目的基因后，先構(gòu)建T-A克隆載體，將基因在大腸桿菌中進(jìn)行擴(kuò)增，然后酶切陽性T-A載體和目標(biāo)載體，最后進(jìn)行目的基因和目的載體的連接。這個過程大概需要1-2周來完成，而且具有很大的局限性，主要表現(xiàn)在：1、載體多克隆位點(diǎn)和基因內(nèi)部酶切位點(diǎn)的局限性；2、基因克隆過程中需要添加酶切位點(diǎn)，可能會帶入非特異性擴(kuò)增；3、對于長片段與目標(biāo)載體的連接效果差；4、無法實(shí)現(xiàn)大規(guī)模載體的構(gòu)建。

IN-FUSION技術(shù)主要來源于INFUSION酶的發(fā)現(xiàn)，（如圖）INFUSION酶能夠識別線性化的DNA片段5’-3’末端任意16堿基，使其形成粘性末端。目標(biāo)質(zhì)粒通過酶切或者PCR線性化后，也能被INFUSION酶識別。只需要載體和基因形成的粘性末端互補(bǔ)，通過退火的過程就能完成載體的構(gòu)建。IN-FUSION技術(shù)相比于傳統(tǒng)酶切連接技術(shù)優(yōu)點(diǎn)在于：1、擺脫了酶切位點(diǎn)的束縛；2、連接效率高，構(gòu)建周期短，為普通酶切連接體系的200-500倍；3、對3000bp以上的基因載體構(gòu)建成功率高；4、適用于大規(guī)模載體構(gòu)建。

圖1：IN-FUSION技術(shù)流程

云克隆對原有的IN-FUSION技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)優(yōu)化，開發(fā)出一種高效的INFUSION酶和配套的技術(shù)體系，適用于各種長短片段載體的構(gòu)建，并提供各類型載體構(gòu)建服務(wù)，歡迎咨詢！

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