腎積水(hydronephrosis)是指尿液從腎盂排出受阻，蓄積后腎內(nèi)壓力增高，腎盂腎盞擴(kuò)張，腎實質(zhì)萎縮，導(dǎo)致腎功能減退。梗阻性腎病其主要的病理生理改變是腎積水、腎盂及腎小管壓力升高、腎間質(zhì)水腫、炎性細(xì)胞浸潤、腎間質(zhì)內(nèi)成纖維細(xì)胞增生、腎間質(zhì)膠原蛋白聚集、腎間質(zhì)增寬、腎小管萎縮，最終導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化和腎單位減少，引起腎功能衰竭。

單側(cè)輸尿管梗阻是比較成熟的腎間質(zhì)纖維化模型，結(jié)扎2周就可有成纖維細(xì)胞的增生和間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)的生成。但是由于輸尿管的結(jié)扎使患側(cè)腎盂中的尿液不能外排，加上對側(cè)腎臟的代償作用，所以一般情況模型組血肌酐、尿素氮、NAG以及24h尿蛋白僅明顯高于正常組，但還處于正常范圍之內(nèi)，同時對側(cè)腎一般也無明顯改變，而患側(cè)腎臟組織中大量炎癥細(xì)胞浸潤、腎小管和間質(zhì)的結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞以及腎間質(zhì)纖維化，最后腎間質(zhì)呈現(xiàn)廣泛的纖維化，而腎小球幾乎沒有病變。因此單側(cè)輸尿管梗阻模型在研究腎間質(zhì)纖維化方面使研究的靶點明確，有利于其病變機(jī)理及抗間質(zhì)纖維化治療的研究。

1.實驗動物

 SPF級Wistar大鼠，健康，雄性，體重為180g~200g

    2.實驗分組

    實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組，每組15只動物。

3.實驗周期

7d，14d，21d，28d

4.建模方法

1術(shù)前一晚禁食,自由飲水。

2稱量大鼠，腹腔注射水合氯醛（15%）350mg/kg麻醉，剃毛固定后用碘酒及酒精擦拭手術(shù)區(qū)域。

3在上腹中線偏左約3-4mm剪開腹壁，手術(shù)組分離出左腎輸尿管。

4 在靠近腎下極處結(jié)扎并分離輸尿管，然后雙結(jié)扎，在2個結(jié)扎中間剪斷輸尿管，逐層縫合肌層及腹壁，酒精清潔縫合處。待小鼠清醒后，將其放回潔凈籠具后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，定期觀察大鼠狀態(tài)及死亡情況并做好記錄。

5置于加熱墊至其蘇醒。假手術(shù)組不結(jié)扎輸尿管，其余步驟相同。

6術(shù)后三天連續(xù)注射青霉素20萬單位/天防止感染。

  5模型的評價

5.1 蛋白尿含量、尿NAG活性測定  模型組術(shù)后2周、4周的24h尿蛋白含量以及尿酶NAG活性比正常組和假手術(shù)組明顯上升。

5.2 血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量測定  手術(shù)4周后，模型組血清Scr和BUN含量相對于正常組和假手術(shù)組有穩(wěn)定的升高。

5.3 形態(tài)學(xué)觀察：術(shù)后取左腎于4%多聚甲醛固定，依次脫水、透明、石蠟包埋、切片。做HE染色及Masson染色，光鏡觀察腎小球、腎小管-間質(zhì)的病理變化及炎性細(xì)胞浸潤情況。可見模型組小鼠的腎間質(zhì)出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤，腎小管上皮細(xì)胞萎縮、刷狀緣消失、腎小管管腔擴(kuò)張呈囊狀，管腔塌陷，間質(zhì)明顯增寬，間質(zhì)內(nèi)可見大量炎性細(xì)胞浸潤，伴有較多的成纖維細(xì)胞增生。并隨時間的延長炎癥細(xì)胞浸潤加重，小管上皮細(xì)胞扁平、脫落，腎小管萎縮、擴(kuò)張加重，甚至塌陷、消失，膠原纖維增生，間質(zhì)纖維化加重 。

6  注意事項

1 分離輸尿管時注意不要損傷腎臟

2 注意清理傷口，防止感染。

3.取下腎臟后要剝離腎表面的結(jié)締組織薄膜。

圖1 腎臟大體圖（左邊為未結(jié)扎側(cè)腎，右邊為輸尿管結(jié)扎側(cè)腎，腎盂積水，腎臟體積明顯擴(kuò)大，皮質(zhì)變薄）