小鼠肺栓塞模型
肺血栓栓塞癥(PTE)是內(nèi)源性或外源性血栓栓子堵塞肺動(dòng)脈所引起肺循環(huán)障礙的臨床和病理生理綜合征,是一種相對(duì)常見(jiàn)的心血管急重癥,其因栓子堵塞肺動(dòng)脈血管床從而引起危及生命的右心衰竭。其發(fā)病率在心血管疾病中僅次于冠心病和高血壓,未經(jīng)及時(shí)治療的肺栓塞死亡率高達(dá)20%~30%,由于對(duì)該病的認(rèn)識(shí)不足,加上其臨床表現(xiàn)缺乏特異性,誤漏診率高達(dá)70%~90。該病發(fā)病率高,預(yù)后嚴(yán)重,是肺部疾患中最常見(jiàn)的死亡原因.
1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
SPF級(jí)Balb/C小鼠,雄性,周齡為4w~6w,體重為22g~26g。
2.實(shí)驗(yàn)分組:
實(shí)驗(yàn)分組:正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥組、受試藥組,每組15只。
3.主要試劑
凝血酶
4.建模方法
4.1選取體重22g-26g的小鼠,以3%戊巴比妥鈉,以80mg/kg劑量腹腔麻醉小鼠,小鼠取仰臥位,將四肢和頭部用膠布固定在解剖板上,用8%硫化鈉對(duì)頸部脫毛,活力碘消毒后準(zhǔn)備手術(shù)。
4.2頸部正中切口,逐步分離軟組織和肌肉,暴露左側(cè)頸靜脈,向頸內(nèi)靜脈注射
凝血酶溶液(溶于0.9%生理鹽水,劑量20U/kg)。
4.3清理術(shù)野,縫合頸部切口,待小鼠清醒后,將其放回潔凈籠具后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng),定期觀察小鼠狀態(tài)及死亡情況并做好記錄。
4.4假手術(shù)除僅向頸靜脈注射生理鹽水以外,其他操作均相同。
4.5 在模型建立后24h,分別處死小鼠,取左側(cè)部分肺組織于4%多聚甲醛溶液固定,石蠟包埋;其余肺組織-80度保存。
5.模型的評(píng)價(jià)
5.1外周血血小板計(jì)數(shù)
取小鼠外周血20μl,置于盛有380μl (10g/L)草酸氨稀釋液的無(wú)菌EP管中,混勻后用血球記數(shù)板行血小板計(jì)數(shù)。
5.2組織病理評(píng)價(jià)
取左肺4%多聚甲醛固定,然后將肺組織常規(guī)脫水,石蠟包埋,切片(厚度為5μm),HE染色。術(shù)后幾小時(shí)即可見(jiàn)肺泡里大量滲出并有出血,肺泡間隔增厚,其內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),可見(jiàn)較大的動(dòng)脈栓塞,血小板和紅細(xì)胞聚集粘附在栓子周?chē)?/p>
5.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(`x ±s)表示,采用t檢驗(yàn),組間比較采用單因素方差分析,P<0.05表示有顯著性差異,P<0.01表示有極顯著性差異。
圖1 肺組織HE染色圖,模型組肺泡內(nèi)可見(jiàn)大量滲出并有出血,肺泡內(nèi)間隔增厚,其內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),可見(jiàn)較大的血管栓塞