腎積水(hydronephrosis)是指尿液從腎盂排出受阻，蓄積后腎內(nèi)壓力增高，腎盂腎盞擴(kuò)張，腎實(shí)質(zhì)萎縮，導(dǎo)致腎功能減退。梗阻性腎病其主要的病理生理改變是腎積水、腎盂及腎小管壓力升高、腎間質(zhì)水腫、炎性細(xì)胞浸潤、腎間質(zhì)內(nèi)成纖維細(xì)胞增生、腎間質(zhì)膠原蛋白聚集、腎間質(zhì)增寬、腎小管萎縮，最終導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化和腎單位減少，引起腎功能衰竭。

單側(cè)輸尿管梗阻是比較成熟的腎間質(zhì)纖維化模型，結(jié)扎2周就可有成纖維細(xì)胞的增生和間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)的生成。但是由于輸尿管的結(jié)扎使患側(cè)腎盂中的尿液不能外排，加上對側(cè)腎臟的代償作用，所以一般情況模型組血肌酐、尿素氮、NAG以及24h尿蛋白僅明顯高于正常組，但還處于正常范圍之內(nèi)，同時(shí)對側(cè)腎一般也無明顯改變，而患側(cè)腎臟組織中大量炎癥細(xì)胞浸潤、腎小管和間質(zhì)的結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞以及腎間質(zhì)纖維化，最后腎間質(zhì)呈現(xiàn)廣泛的纖維化，而腎小球幾乎沒有病變。因此單側(cè)輸尿管梗阻模型在研究腎間質(zhì)纖維化方面使研究的靶點(diǎn)明確，有利于其病變機(jī)理及抗間質(zhì)纖維化治療的研究。

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    SPF級Balb/C小鼠，健康，雄性，4~6W，體重為18g~20g

    2.實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組，每組15只動(dòng)物。

3.實(shí)驗(yàn)周期

7d，14d，21d，28d

4.建模方法

1. 小鼠3%戊巴比妥鈉80mg/kg腹腔麻醉后側(cè)臥，左側(cè)背部脫毛

2. 在大腿上方脊椎左側(cè)25px處開口，剪開皮膚及肌肉，

3. 分離出左側(cè)輸尿管，在其上1/3處游離輸尿管，6號線結(jié)扎2道，在其間剪斷輸尿管，清理傷口后分兩層縫合，待小鼠清醒后，將其放回潔凈籠具后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，定期觀察小鼠狀態(tài)及死亡情況并做好記錄。

4. 在模型建立后7d，14d，21d，28d分別處死小鼠，取左側(cè)部分腎組織于4%多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋；其余腎組織液氮冷凍，-80度保存。

  5模型的評價(jià)

1. 蛋白尿含量、尿NAG活性測定  模型組術(shù)后2周、4周的24h尿蛋白含量以及尿酶NAG活性比正常組和假手術(shù)組明顯上升。

2. 血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量測定  手術(shù)4周后，模型組血清Scr和BUN含量相對于正常組和假手術(shù)組有穩(wěn)定的升高。

3. 形態(tài)學(xué)觀察：術(shù)后取左腎于4%多聚甲醛固定，依次脫水、透明、石蠟包埋、切片。做HE染色及Masson染色，光鏡觀察腎小球、腎小管-間質(zhì)的病理變化及炎性細(xì)胞浸潤情況?？梢娔Ｐ徒M小鼠的腎間質(zhì)出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤，腎小管上皮細(xì)胞萎縮、刷狀緣消失、腎小管管腔擴(kuò)張呈囊狀，管腔塌陷，間質(zhì)明顯增寬，間質(zhì)內(nèi)可見大量炎性細(xì)胞浸潤，伴有較多的成纖維細(xì)胞增生。并隨時(shí)間的延長炎癥細(xì)胞浸潤加重，小管上皮細(xì)胞扁平、脫落，腎小管萎縮、擴(kuò)張加重，甚至塌陷、消失，膠原纖維增生，間質(zhì)纖維化加重 。

6 注意事項(xiàng)

1 分離輸尿管時(shí)注意不要損傷腎臟。

2 注意清理傷口，防止感染。

3.取下腎臟后要?jiǎng)冸x腎表面的結(jié)締組織薄膜。

圖1 腎臟大體圖（左邊為未結(jié)扎側(cè)腎，右邊為輸尿管結(jié)扎側(cè)腎，腎實(shí)質(zhì)已發(fā)生嚴(yán)重萎縮）