類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一個(gè)累及周圍關(guān)節(jié)為主的多系統(tǒng)性、炎癥性的自身免疫疾病，其特征性癥狀為對(duì)稱性、周圍性多個(gè)關(guān)節(jié)慢性炎癥病變，其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，迄今尚未完全闡明。

佐劑性關(guān)節(jié)炎模型是Freund于20世紀(jì)50年代創(chuàng)立的，又稱弗氏佐劑關(guān)節(jié)炎，弗氏佐劑分為完全佐劑(CFA)和不完全佐劑(IFA)。其機(jī)制是結(jié)核桿菌致關(guān)節(jié)炎抗原為65 kD熱休克蛋白(HSP)，RA病人軟骨內(nèi)具有與65kD HSP相似的蛋白多糖橋聯(lián)蛋白抗原成分，F(xiàn)CA注入激活T細(xì)胞，激活T細(xì)胞參與RA發(fā)病機(jī)制。此模型存在明顯的細(xì)胞免疫異常，為一種典型的免疫性炎癥模型，并且制作方法簡(jiǎn)單，可廣泛應(yīng)用于多種動(dòng)物，便于研究者選擇應(yīng)用。研究表明，在 RA 發(fā)病過程中，促炎細(xì)胞因子(IL-1，TNF-α，IFN-γ，IL-2 等) 和抗炎細(xì)胞因子 (IL-4，IL-10，TGF-β等) 的不平衡占有重要地位，其中 IL-1 和 TNF-α 參與多種病理學(xué)過程，在發(fā)病機(jī)制中尤為重要。

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)Babl/C小鼠，健康，雄性，體重為18g-22g。

2.實(shí)驗(yàn)分組：

實(shí)驗(yàn)分六組：正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥組、受試藥組三個(gè)劑量組，每組15只動(dòng)物。

3.主要試劑

完全弗氏佐劑(CFA)（Sigma公司）

4.建模方法

抓取小鼠，于右后足皮內(nèi)注射 0.1 mL CFA 致炎，從而建立小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型；對(duì)照組于右后足趾皮下注射0.01moL/L 冰醋酸 0. 1mL，以排除 CFA 中溶劑的致敏效應(yīng)。

5模型的評(píng)價(jià)

5.1體質(zhì)重測(cè)定：分別于0d、7d、14d、21d、28d記錄小鼠的體重，比較模型組小鼠體重和對(duì)照組小鼠的體重變化；

5.2免疫評(píng)價(jià)：

稱量小鼠體重，處死小鼠，取出脾和胸腺，生理鹽水漂洗后用紗布吸干表面水分，分別于電子天平上稱質(zhì)量(濕質(zhì)量)，并計(jì)算臟器指數(shù)。

臟器指數(shù) = 器官濕質(zhì)量(mg) /小鼠體重(g)

5.3足跖腫脹值（mm）測(cè)定：

足趾腫脹度是佐劑性關(guān)節(jié)炎測(cè)量的一個(gè)重要指標(biāo)。0d時(shí)在小鼠足跖同一地方做標(biāo)記，用電子游標(biāo)卡尺以標(biāo)記為準(zhǔn)，測(cè)定小鼠足跖厚度，以后每隔7d(7、14、21d和28d時(shí))再分別測(cè)量，進(jìn)行自身左右側(cè)足跖對(duì)照和組別間對(duì)照。

5.4關(guān)節(jié)炎指數(shù)(arthritisindex index，AI)評(píng)價(jià)：

采用關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分評(píng)價(jià)其關(guān)節(jié)炎癥程度。除了誘導(dǎo)部位右后足以外，根據(jù)其余3只未注射的肢體病變程度和趾間是否發(fā)炎對(duì)每一足爪分別進(jìn)行打分，以0～4分記錄，累積得分即為每只小鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)。

0分：無紅斑和腫脹的證據(jù)；

1分：紅斑和輕度腫脹局限于足中段或踝關(guān)節(jié)；

2分：紅斑和輕度腫脹從踝關(guān)節(jié)蔓延至足中段；

3分：紅斑和輕度腫脹從踝關(guān)節(jié)蔓延至關(guān)節(jié)；

4分：紅斑和重度腫脹包括了踝、足和趾；

5.5組織病理學(xué)評(píng)價(jià)：

處死小鼠，留取剔除軟組織的后肢踝關(guān)節(jié)，固定、脫鈣、包埋、石蠟切片后行HE染色作組織學(xué)觀察。正常小鼠踝關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)正常，無炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，滑膜細(xì)胞排列整齊，軟骨表面光滑，關(guān)節(jié)腔內(nèi)未見滲出液；模型組小鼠關(guān)節(jié)破壞明顯，周圍大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，滑膜增生肥厚，纖維組織增生，軟骨及骨骼損傷。

5.6小鼠血清中 炎癥因子含量測(cè)定：

小鼠3%戊巴比妥鈉麻醉后，摘取眼球取血，靜止30min，4℃離心機(jī)3000r/min離心10min，分離出上層血清，置-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。使用ELISA試劑盒檢測(cè)TNFα、IL-1β等細(xì)胞因子。

5.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

　應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（`x ±ｓ）表示，采用ｔ檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05表示有顯著性差異，P<0.01表示有極顯著性差異。