在上期專題中我們講到小分子半抗原的結(jié)構(gòu)修飾，這期我們將展開講述載體蛋白的選擇以及偶聯(lián)方法。

載體蛋白是一種自身就能引發(fā)免疫反應(yīng)的大分子，許多不同種類的載體蛋白與小分子偶聯(lián)后可制備成完全的抗原。常用的載體包括牛血清白蛋白、鑰孔血藍(lán)蛋白、卵清蛋白、牛甲狀腺球蛋白等。

對于載體蛋白的選擇，主要涉及其溶解性、大小、偶聯(lián)基團(tuán)、免疫原性、成本價(jià)格等因素。目前市面上應(yīng)用最為廣泛的是牛血清白蛋白BSA(三維結(jié)構(gòu)如圖1)，主要是由于BSA化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不易變性，分子內(nèi)含有多種氨基，且賴氨酸含量高，廉價(jià)易得。但BSA由于在一些免疫檢測實(shí)驗(yàn)中作為阻斷劑而限制了它的使用。其次選擇較多的是鑰孔血藍(lán)蛋白KLH以及卵清蛋白OVA。

我們簡要介紹下半抗原與載體偶聯(lián)方法：

1，帶羧基或者氨基類的化合物，用碳化二亞胺法以及混合酸酐法；

2，含巰基類的化合物，用馬來酰亞胺法；

3，分子結(jié)構(gòu)中帶有氨基類的化合物，戊二醛法，最為常用的一種方法。

一般半抗原和載體蛋白，按照上述方法，選擇合適的偶聯(lián)比率室溫反應(yīng)或者4℃反應(yīng)過夜，再用分離柱或者透析袋透析2d，得到完全抗原。

對于獲得的完全抗原，可通過紫外掃描法，將偶聯(lián)后的產(chǎn)物與未偶聯(lián)的載體蛋白進(jìn)行對比，比較兩者的紫外吸收的變化。人工完全抗原的紫外吸收特征兼具有或不同于原半抗原和載體蛋白的紫外吸收特征，則判斷偶聯(lián)成功，然后通過運(yùn)算，得到最終的偶聯(lián)率。

云克隆公司經(jīng)過大量的研發(fā)，可提供多種類型的偶聯(lián)小分子化合物和多肽，可供研究人員選擇使用。

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