內(nèi)參蛋白抗體介紹III
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我們知道，內(nèi)參蛋白是指由管家基因（house keeping gene）編碼表達(dá)的一類蛋白，它們在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定，在實(shí)驗(yàn)中檢測蛋白的表達(dá)水平變化時(shí)常用它們來做參照物。
這些內(nèi)參蛋白常應(yīng)用于Western Blot中，Western Blot不僅能證明樣品中是否含有某種蛋白，還能比較不同條件、不同組織和細(xì)胞中目的蛋白的相對含量，從而衡量蛋白的表達(dá)水平。內(nèi)參蛋白作為一種參照物，在其中的作用為確定樣本使用量的一致性，以及校正實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的操作誤差，從而進(jìn)一步保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。那么對于不同的蛋白，內(nèi)參蛋白該如何選擇呢？
前面兩節(jié)已經(jīng)介紹了幾種常見內(nèi)參蛋白的選擇和應(yīng)用，這一節(jié)我們將系統(tǒng)介紹不同內(nèi)參蛋白的選擇及云克隆公司現(xiàn)有內(nèi)參蛋白抗體。
對于內(nèi)參蛋白的選擇首先是考慮分子量。一般情況下，內(nèi)參蛋白和檢測的目的蛋白最好相差在5kDa以上。如分子量為45kDa的檢測蛋白，我們可以選擇Tubulin Beta（54kDa），Lamin B1（66kDa）等，而不選擇ACTa2（42kDa）或者beta-actin（45kDa）。
其次對于不同的組織，應(yīng)選擇不同的內(nèi)參。如肌動(dòng)蛋白是一種細(xì)胞骨架蛋白，有六種不同的亞型，包括： alpha-skeletal muscle actin、alpha-cardiac muscle actin、alpha-smooth muscle actin、gamma-smooth muscle actin、beta-actin (β-non-muscle)和 gamma-non-muscle actin。其中常用作 Western Blot 內(nèi)參的beta-actin在肌肉和脂肪組織中分布較少，那么若樣本是心肌或脂肪組織來源的，就可以考慮分別用alpha-cardiac muscle actin (ACTC1)和GAPDH作為內(nèi)參蛋白。
最后，提取蛋白的部位不同，選擇的內(nèi)參蛋白也不同。比如有時(shí)胞質(zhì)、胞核分開提取而不提取總蛋白時(shí)，就要選擇相應(yīng)部位表達(dá)的內(nèi)參蛋白。如PCNA在細(xì)胞核中高效穩(wěn)定表達(dá)，理論上在細(xì)胞質(zhì)不表達(dá)，那么對于胞質(zhì)提取的蛋白，就不能選用PCNA作為內(nèi)參蛋白，而應(yīng)該選擇細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)的Tublin Beta、Actin Beta等作為內(nèi)參蛋白。
云克隆針對蛋白表達(dá)的不同細(xì)胞部位，不同組織，以及不同的分子量，推出一系列的內(nèi)參抗體，滿足使用者的不同需求。見表1。
表1. 各種內(nèi)參蛋白抗體
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| ? 內(nèi)參蛋白（靶蛋白） ? | 亞細(xì)胞定位 | 目標(biāo)蛋白的分子量 | ?目標(biāo)蛋白的組織表達(dá)部??位 |
| 甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH) | 胞質(zhì)，核，膜 | 36kDa | 胰腺，乳腺，胃等 |
| 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1(ERK1) | 胞質(zhì)，核 | 43kDa | 腦，小腸，食道等 |
| 細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶2(ERK2) | 胞質(zhì)，核 | 42kDa | 腎，乳腺，睪丸等 |
| 組蛋白H3(Histone H3) | 核 | 17kDa | 肝，腎，肺，睪丸，胃等 |
| 抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA) | 核 | 35kDa | 睪丸，小腸，甲狀腺等 |
| 核纖層蛋白B1(LMNB1) | 核 | 66kDa | 腦，肝等 |
| 核纖層蛋白A/C(LMNA) | 核 | 74kDa | 平滑肌 |
| 平滑肌肌動(dòng)蛋白α2(ACTa2) | 胞質(zhì) | 42kDa | 平滑肌，乳腺等 |
| 心肌肌動(dòng)蛋白α1(ACTC1) | 胞質(zhì) | 42kDa | 肌肉 |
| 肌動(dòng)蛋白β(ACTb) | 胞質(zhì) | 45kDa | 闌尾，脾扁桃體，胃，乳腺等 |
| 微管蛋白β(TUBb) | 胞質(zhì) | 54kDa | 腦，睪丸，皮膚，結(jié)腸等 |
| 70kDa熱休克蛋白1A(HSPA1A) | 胞質(zhì) | 70kDa | 食道，甲狀腺等 |
| 連環(huán)蛋白β1(CTNNb1) | 胞質(zhì) | 85kDa | 結(jié)腸，皮層神經(jīng)元等 |
| 紐蛋白(VCL) | 胞質(zhì) | 124kDa | 肌肉 |
| 電壓依賴性陰離子通道蛋白1(VDAC1) | 線粒體外膜 | 31kDa | 肺，肝，睪丸，胎盤等 |
| 鈣聯(lián)蛋白(CNX) | 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) | 90kDa | 腦，胃，腎等 |
| 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR) | 細(xì)胞膜 | 85kDa | 肝 |
| 鈉/鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶α1肽(ATP1a1) | 細(xì)胞膜 | 113kDa | 甲狀腺，胰腺，前列腺等 |
| 血小板衍生生長因子受體α(PDGFRa) | 細(xì)胞膜 | 123kDa | 血小板，腦，心 |
| 細(xì)胞色素C氧化酶亞基IV亞型1(Cytochrome C Oxidase Subunit IV Isoform 1, COX4I1) | 線粒體內(nèi)膜 | 20kDa | 肌肉，腦，肝，腎等 |
| TATA盒結(jié)合蛋白（TATA Binding Protein, TBP） | 核 | 38kDa | 睪丸，卵巢等 |
| 組蛋白脫乙酰基酶1（Histone Deacetylase 1，HDAC1） | 核 | 55kDa | 心，胰腺，睪丸等 |
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