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?基因作為生物體最為重要的信息載體，儲(chǔ)存著生物體全部的遺傳信息，決定著生物的性狀、分類、生命周期等各種特征，然而基因往往不直接參與生命活動(dòng)的調(diào)控。對(duì)于高等生物，在滿足“中心法則”原則的情況下，基因（DNA）通過轉(zhuǎn)錄形成RNA，一些RNA通過特定的方式翻譯形成蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)才是直接參與生物性狀決定的最主要物質(zhì)。RNA作為聯(lián)系基因和蛋白的重要橋梁，在基因信息的翻譯以及調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄、核酸剪切等多方面的具有重要作用，這也使得對(duì)于RNA的研究和檢測(cè)顯得尤為重要。

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?RNA檢測(cè)其實(shí)對(duì)于我們每個(gè)人都不陌生，前段時(shí)間令人聞風(fēng)喪膽的禽流感病毒和乙型肝炎病毒復(fù)制度的檢測(cè)。天然狀態(tài)的RNA常為單鏈，結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，容易被RNA酶降解，需要在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下轉(zhuǎn)化形成更為穩(wěn)定的cDNA，以方便檢測(cè)。目前cDNA定量檢測(cè)方式主要以Real Time qPCR染料法和Real Time qPCR探針法為主。

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?Real Time qPCR染料法(如圖1所示)采用一種能與DNA特殊結(jié)合的熒光染料SYBR Green。SYBR Green屬于一種結(jié)構(gòu)扁平的化學(xué)小分子，具有微弱的熒光，能夠特異性與DNA的小溝結(jié)合并發(fā)出強(qiáng)烈熒光，熒光的強(qiáng)度與體系中DNA的含量成正比。染料法具有操作簡單、價(jià)格便宜等諸多優(yōu)點(diǎn)，但是也存在由于熒光染料能與所有的DNA結(jié)合而引起的特異性不強(qiáng)、只能相對(duì)于內(nèi)參進(jìn)行相對(duì)定量等缺點(diǎn)，這也決定了染料法通常僅限于實(shí)驗(yàn)室使用，而在醫(yī)學(xué)診斷中使用有限。

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?Real Time qPCR探針法（如圖2所示）需要人工合成帶有發(fā)光基團(tuán)R和淬滅基團(tuán)P（常采用MGB修飾）的單鏈DNA探針以及一對(duì)特異性的PCR引物。單鏈DNA探針需特異性的識(shí)別和結(jié)合cDNA預(yù)擴(kuò)增區(qū)域。當(dāng)發(fā)光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)與DNA探針結(jié)合完好時(shí)，反應(yīng)體系將不具有熒光，而在PCR的過程中，由于Taq酶具有5′-3′外切酶活性(此活性是雙鏈特異性的，游離的單鏈探針不受影響)，將會(huì)使與cDNA結(jié)合的探針5′端的發(fā)光基團(tuán)游離出來而發(fā)出熒光，熒光的強(qiáng)度與復(fù)制的次數(shù)成正比。探針法雖然存在操作較復(fù)雜、價(jià)格偏高、探針設(shè)計(jì)和標(biāo)記復(fù)雜等方面的不足之處，但是具有特異性強(qiáng)，測(cè)值穩(wěn)定，能夠完全定量等一系列的特點(diǎn)，使得探針法能在醫(yī)學(xué)診斷中被廣泛使用。

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Cloud-Clone Corp.長期為客戶提供Real Time qPCR檢測(cè)服務(wù)，在引物和探針設(shè)計(jì)、合成方面積累了大量的經(jīng)驗(yàn)。同時(shí)配套有動(dòng)物模型和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)，為客戶提供更為全面的一站式服務(wù)體驗(yàn)。

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