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?細(xì)胞是以分裂的方式進(jìn)行增殖的。單細(xì)胞生物，以分裂的方式產(chǎn)生新個體。多細(xì)胞生物，以分裂的方式產(chǎn)生新細(xì)胞，從而補(bǔ)充體內(nèi)衰老或死亡的細(xì)胞，有絲分裂是真核生物進(jìn)行細(xì)胞分裂的主要方式。細(xì)胞增殖是生物體生長發(fā)育、繁殖遺傳的基礎(chǔ)，所以對細(xì)胞增殖的檢測一直是一大研究熱點(diǎn)。

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?常規(guī)細(xì)胞增殖檢測技術(shù)包括以下幾種：

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?（1）標(biāo)志蛋白的WB檢測等。

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?PCNA（Proliferating Cell Nuclear Antigen）是增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，在DNA復(fù)制以及細(xì)胞增殖的啟動中起重要作用。Ki67也是一種細(xì)胞增殖核抗原，在有絲分裂中維持DNA結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，在細(xì)胞周期G0期無表達(dá)，G1期開始表達(dá)，S期和G2期表達(dá)量逐漸升高，M期表達(dá)量最高，有絲分裂結(jié)束后則降解消失。WB實(shí)驗(yàn)可對PCNA或Ki67的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，從而間接得知細(xì)胞增殖情況。

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?優(yōu)勢：簡便性，廣泛性，無組織特異性。

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?劣勢：間接反映細(xì)胞增殖的情況。

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?（2）EdU檢測

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EdU （5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，在細(xì)胞增殖時能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中?；贓dU與熒光染料的特異性反應(yīng)檢測DNA復(fù)制活性。現(xiàn)多用EdU檢測替代BrdU檢測。

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優(yōu)勢：體外實(shí)驗(yàn)，檢測靈敏度高，可與多種抗體或熒光蛋白同時標(biāo)記。

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?劣勢：具有毒性。

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?（3）CFSE檢測法

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羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂（CFSE）是一種熒光染料，可穿透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后不可逆的與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上，細(xì)胞分裂時，標(biāo)記熒光平均分配至2個子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半。利用流式細(xì)胞儀的488nm激發(fā)光檢測。

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優(yōu)勢：直接法，活細(xì)胞檢測。

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?劣勢：CFSE濃度太低，熒光強(qiáng)度不夠；濃度太高，毒性影響細(xì)胞增殖。

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?（4）CCK8檢測法。

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?CCK8檢測法是MTT檢測法的升級版。CCK8檢測試劑中含有WST-8，WST-8是一種類似于MTT的化合物，可被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成水溶性的甲臜。細(xì)胞增殖越多越快，顏色越深。酶聯(lián)免疫檢測儀測定450nm吸光度。

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?優(yōu)勢：簡便，結(jié)果直觀，活細(xì)胞檢測。

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?劣勢：間接反映活細(xì)胞數(shù)量。CCK8試劑顏色為淡紅色，與含酚紅的培養(yǎng)基顏色相近，不注意的話容易漏加或多加。

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云克隆公司現(xiàn)推出了活性蛋白產(chǎn)品，活性蛋白對細(xì)胞增殖影響的檢測，我們多采用的是CCK8檢測法結(jié)合鏡檢觀察。如表皮生長因子活性蛋白（APA560Hu02），其濃度升高后，可刺激3T3細(xì)胞增殖，結(jié)果如下:

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