1. 烘片：60℃烘片0.5-2小時。

2. 脫蠟水化：烘片結(jié)束后，石蠟切片依次置于以下試劑中：

    1）二甲苯I：30 min

    2）二甲苯II：30 min

    3）100%乙醇：10 min

    4）95%乙醇：10 min

    5）80%乙醇：10 min

    6）70%乙醇：10 min

    7）自來水沖洗10 min

3. 抗原修復(fù)-微波爐抗原熱修復(fù)法（可選）：將組織切片轉(zhuǎn)移到沸騰的EDTA-Tris 溶液中使其完全浸透。低火加熱一分鐘，停止加熱并靜置于微波爐中10min。然后再低火加熱3-4分鐘，停止加熱，使EDTA-Tris 溶液在室溫自然冷卻。

4. PBST漂洗3次：去除殘留并浸泡在PBST中，在搖床中以40 RPM漂洗5 min，重復(fù)3次。

5. 阻斷內(nèi)源過氧化物酶：用3%-5% H2O2室溫孵育10min。

6. PBST漂洗3次：去除殘留并浸泡在PBST中，在搖床中以40 RPM漂洗5 min，重復(fù)3次。

7. 封閉：去除殘留，用5%BSA室溫孵育20 min。

8. 孵育一抗：去除殘留，用已稀釋至工作液的一抗4℃孵育過夜（推薦使用）或37℃孵育60min。

9. 復(fù)溫：將切片從4℃移至室溫靜置約需20min。

10. PBST漂洗3次：去除殘留并浸泡在PBST中，在搖床中以40 RPM漂洗5 min，重復(fù)3次。

11. 孵育HRP標(biāo)記的二抗：去除殘留物，用已稀釋至工作液的二抗4℃孵育60min。

12. PBST漂洗3次：去除殘留物并浸泡在PBST中，在搖床中以40 RPM沖洗5 min，重復(fù)3次。

13. 顯色：使用DBA試劑盒（Cat # IS046）進行組織切片的顯色。按照說明書混合試劑A和B，在切片上滴加適量新鮮配制的DBA溶液，室溫孵育0.5~10min，直到出現(xiàn)棕色，用蒸餾水終止顯色并清洗切片。

14. 蘇木精復(fù)染，然后將組織切片晾干，滴上樹脂，用蓋玻片蓋住組織部分，在顯微鏡下觀察。