介紹：

免疫磁珠分選，是基于抗原抗體特異性識別的原理，使用高度特異性單克隆抗體偶聯(lián)的磁化微粒對目的細胞進行特異性的磁性標記。通過高強度、梯度磁場從而達到細胞磁性分離的目的。

可應用范圍：

特定表型的細胞

特定細胞因子分泌細胞

轉染細胞

凋亡細胞

磁珠分選特點：

ü 磁珠分選后可獲得高純度（大于90%）、高得率的目的細胞。

ü 磁化微粒和分選柱對細胞無毒性、無損傷，可生物降解。純化后細胞不影響活性和功能。

ü 除目的細胞外的其它細胞群均可回收利用。

ü 可實現(xiàn)10e5到10e11總細胞數的分選。

ü 與流式細胞儀兼容，不影響細胞光學特效、不影響熒光抗體染色。

分選策略：

陽性分選：將目的細胞磁性標記后，作為陽性組分直接分選?；厥章矢?，適合富集低比例細胞。

去除分選（陰性分選）：將非目的細胞磁性標記后，從總細胞中去除。即未磁性標記的細胞為目的細胞。這種方式目的細胞不與抗體結合，適合于缺乏針對目的細胞的特異性抗體的情況（某些稀有標志）。

去除分選+陽性分選：先去除非目的細胞，再進行陽性分選。適用于非目的細胞也表達陽選標志的情況，可獲得高純度的非常稀有的細胞。

客戶實際案例展示

小鼠脾臟CD4+細胞的分選

1、分離小鼠脾臟淋巴細胞：

① 小鼠經脫頸處死。浸入75%的乙醇中浸泡1-2min。轉入超凈工作臺中，腹面朝上，剪開小鼠左側下腹部皮膚，分離小鼠脾臟置入200目篩網上，滴加淋巴細胞分離液4-5ml/個脾臟，用注射器活塞輕輕研磨，使脾臟細胞充分透過篩網過濾至下方容器中。

② 將脾臟細胞懸液轉移到離心管中，最上層覆蓋2ml無血清1640 培養(yǎng)基，800g室溫離心30 min。

③ 吸出淋巴細胞層，加入10ml無血清1640 培養(yǎng)基洗滌，250g 室溫離心10min。棄去上清。

2、CD4+ 磁珠分選：

① Fc受體封閉：加入FACs buffer 稀釋的anti-CD16/CD32  antibody工作液， 4℃孵育30min。

② 200目篩網再次過濾。1000rpm 4℃離心10min。

③ 磁珠孵育：FACs buffer 稀釋磁珠及表面染色抗體，加入CD4+ beads工作液,4℃避光孵育30min。

④ 1000rpm 4℃離心10min。珠分選柱安放在分選器中，加3ml FACs buffer入加樣池內潤洗柱子。待分選柱中液體自然流干后，將離心后細胞輕柔加入分選柱加樣池中，等待樣品完全自然流出。

⑤ 洗滌分選柱。

⑥ 將分選柱移出分選器磁場，擱置在15ml離心管上，加5ml 原代細胞完全培養(yǎng)基入加樣池內，迅速一次性打出所有液體。

⑦ 離心洗滌。

3、分選后流式染色鑒定：

分別取分選前總細胞、分選后細胞，CD4-FITC染色，流式檢測CD4+細胞數的比例。結果見下

圖：