1. 酶標板包被抗體流程：

1.1按說明書推薦的比例稀釋包被抗體，或者設計預實驗用倍比稀釋的方式稀釋包被抗體，酶標孔中加100ul包被抗體包被。酶標板加上覆膜，4^oC溫育過夜或37^oC溫育2小時。

1.2棄去孔內(nèi)液體，每孔用350μL的洗滌液洗滌，浸泡1-2分鐘。在吸水紙上輕拍酶標板來移除孔內(nèi)所有液體。此過程也可采用噴射瓶，多道移液器 或自動洗板機來完成。

1.3每孔加入200ul封閉液封閉，37^oC溫育1.5小時。

1.4 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板1次，方法同步驟1.2。酶標板包被抗體完成。

2. 實驗流程

2.1按說明書推薦的方法稀釋成不同濃度的標準品工作液，或設計預實驗設定倍比稀釋的多個標準品工作液。酶標板中依次加入100μL不同濃度的標準品，空白孔加100μL標準品稀釋液，余孔加待測樣品100μL，酶標板加上覆膜，37^oC溫育1小時。

2.2 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板1次，方法同步驟1.2。

2.3 按說明書推薦的稀釋倍數(shù)或使用多個不同稀釋倍數(shù)稀釋檢測抗體（生物素標記的單/多克隆抗體），酶標板中每孔加入100μL稀釋后的檢測抗體，酶標板加上覆膜，37^oC溫育1小時。

2.4 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，方法同步驟1.2。

2.5 每孔加酶標親和素工作液（臨用前配制）100μL，酶標板覆膜，37^oC溫育30分鐘。

2.6 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟1.2。

2.7 每孔加TMB底物溶液90μL，酶標板覆膜，37oC避光顯色（反應時間控制在10-20分鐘，不要超過30分鐘。當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯時，即可終止）。

2.8 每孔加終止溶液50μL，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物溶液的加入順序相同。如出現(xiàn)顏色不勻一，請輕輕晃動酶標板以使溶液混合均勻。

2.9 在確保酶標板底無水滴及孔內(nèi)無氣泡后，立即用酶標儀在450nm波長或450/630nm雙波長測量各孔的光密度值（O.D.值）。