酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定實(shí)驗(yàn)（ELISA）是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的定量分析方法，樣本的處理對(duì)于ELISA實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用。剛開始接觸ELISA的時(shí)候，會(huì)遇到一些棘手的問題，容易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)這樣那樣的狀況。

用于ELISA檢測(cè)的常見樣本類型包括血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。這些樣本的收集時(shí)間、處理方法和保存方式都會(huì)影響ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。下面我們將逐一介紹常見的樣本處理方法，供研究者參考。

一、血液樣本

血液采取后應(yīng)盡快進(jìn)行處理，使血清（漿）從與血細(xì)胞接觸的全血中分離出來。

血清與血漿的區(qū)別：

血清是血液凝固后缺少纖維蛋原的血漿，故血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均等同于血清。

選擇血清還是血漿樣本？

由于血清中缺乏很多的凝血因子，但有一些凝血產(chǎn)物，如果是測(cè)凝血相關(guān)靶分子建議選擇血漿樣本；同時(shí)血漿中有纖維蛋白原，如果纖維蛋白原對(duì)待檢測(cè)指標(biāo)有影響，建議選擇血清樣本。大多數(shù)情況下二者均可以選擇。

①　血清：將收集于血清分離管中的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜，然后1,000×g離心20分鐘，取上清即可，將上清置于-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。 

②　血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1,000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

二、組織勻漿

不同類型的組織制備勻漿的方法會(huì)有所不同

1） 取適量組織塊，在預(yù)冷PBS（0.01mol/L， pH=7.0-7.2）中清洗去除血液，勻漿前先稱重。

2） 將組織切成小塊，均勻的放入放置在冰上的裝有新鮮裂解緩沖液(貨號(hào)IS007，應(yīng)依據(jù)目標(biāo)蛋白的亞細(xì)胞定位選擇不同類型的緩沖液)的玻璃均質(zhì)器中（微小的組織也要如此）。（質(zhì)量體積比=1:20-1:50，例如：1mL裂解緩沖液中加入20-50mg組織樣本。）

3） 將得到的懸濁液經(jīng)過超聲處理至澄清。

4） 將制備好的勻漿液10,000×g離心5分鐘，棄沉淀，上清即可用于檢測(cè)或置于-20℃下保存。

三、細(xì)胞裂解液

在分析試驗(yàn)之前，細(xì)胞需利用以下方法處理：

1）貼壁細(xì)胞應(yīng)該用冷PBS輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，于1,000×g 離心5分鐘后收集。（懸浮細(xì)胞可通過離心直接收集）。

2）將收集到的細(xì)胞用冷PBS洗3次；

3）將細(xì)胞用新鮮裂解緩沖液重懸至密度為10⁷個(gè)細(xì)胞/毫升，如果需要，細(xì)胞可以進(jìn)行超聲波處理至溶液澄清。

4）將標(biāo)本于2-8℃ 1,500×g離心10分鐘，棄沉淀，上清即可用于檢測(cè)或置于-20℃下保存。

四、細(xì)胞培養(yǎng)上清

請(qǐng)1,000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

五、糞便

稱取約100mg(80-120mg)糞便，加入5ml PBS，用渦旋器振蕩40秒。然后勻漿糞便溶液25-30分鐘。取1ml勻漿物于新的EP管中，10,000rpm離心20分鐘。吸取上清液至另一個(gè)新的EP管中，即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃ 或-80℃ 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

六、尿液

請(qǐng)收集清晨第一次尿液（中段尿），或24小時(shí)尿液，2,000×g離心15分鐘后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。

七、腦脊液

請(qǐng)離心后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。

樣本的處理是實(shí)驗(yàn)成功的第一步。處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性降解，處理過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的保存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存， 4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃不應(yīng)超過1個(gè)月，-80℃不應(yīng)超過2個(gè)月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。