酶聯免疫吸附測定實驗（ELISA)-特殊樣本處理方法
酶聯免疫吸附測定實驗（ELISA)-特殊樣本處理方法
之前的專題中我們給大家介紹了常規(guī)樣本諸如血清，血漿，組織細胞等的處理方法。這一次我們再跟大家普及一些在ELISA檢測中碰到特殊樣本的處理方式。
v 痰液
選擇痰液中較為粘稠部分稱重，加兩倍于痰量的0.1%DTT(二硫蘇糖醇)37攝氏度恒溫水浴振蕩5分鐘，再加入兩倍于痰量的PBS緩沖液繼續(xù)振蕩15-20分鐘，150目的金屬絲網過濾，1,000×g離心10分鐘吸取上清液-20oC或-80oC冷凍保存。
v 肺泡灌洗液
1,000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20oC或-80oC保存，但應避免反復凍融。
v 唾液
用唾液樣本采集管收集樣本，然后于2-8oC 1,000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或分裝后于-20oC或-80oC保存。避免反復凍融。
注意：唾液一般飯后半小時內不易采集，因為剛進食的唾液中富含唾液淀粉酶，最好空腹時段采集。
v 紅細胞裂解液：
1）將全血于1,000×g離心20分鐘，棄上清收集細胞。
2）將收集的細胞用預冷的PBS（pH 7.0-7.2）洗滌三次。
3）用預冷的PBS重懸細胞，放于-20oC冷凍。然后融化細胞，輕輕混合。反復凍融三次。
4）于2-8oC 5,000×g離心10分鐘，除去細胞碎片。
5）取上清即可檢測，或將上清置于-20oC或-80oC保存，盡量避免反復凍融。
v 乳汁
將標本在2-8oC 10,000×g離心15分鐘，收集水樣成份，每次離心兩次以上，重復3次即可檢測，或將上清置于-20oC或-80oC保存，避免反復凍融。
v 精漿
精液標本收集于無菌容器中，室溫或37oC水浴箱中液化。待精液完全液化后，將精液 4,000 rpm離心10 分鐘分離精漿，即可做ELISA。
v 胸腹水
為防止標本采集時出現凝塊、細胞變性、細菌破壞自溶等，常規(guī)及細胞學檢查胸腹水宜用EDTA-K2 抗凝收集，生化標本宜用肝素抗凝收集。收集后即刻離心，2,500r/分鐘離心5分鐘。取上清即可用于檢測，或將上清置于-20oC或-80oC保存。
除了動物來源的樣本，還有植物樣本在檢測之前也需要進行相應的處理。在這里我們選取了2種植物樣本收集處理方法，以供參考：
v 植物樣本中提取化學分子
1) 取新鮮材料或貯存材料（用100％甲醇固定，放置-10攝氏度冰箱中至待測時）1g，剪碎，加入6ml預冷的80％甲醇溶液，勻漿5分鐘.
2) 勻漿液在4攝氏度下振蕩（或攪拌）24h，過濾。
3) 殘渣再用2ml甲醇液振蕩1h。反復二次，濾液混合。
4) 將濾液在旋轉蒸發(fā)器上干燥減壓蒸發(fā)（36～38攝氏度）至2ml。
5) 再加入1ml石油醚提取部分色素，棄掉石油醚層，取下層甲醇液層。
6) 繼續(xù)減質濃縮至水溶液。在此水溶液中含有IAA、ABA、GA和CTK等。
v 植物樣本中蛋白質提取方法
1）根據樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據材料不同適當調整加入量），準備提取液放在冰上。
2）把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時）。
3）用離心機離心8，000rpm40分鐘（4oC）或11100rpm20分鐘（4oC）
4）提取上清夜，樣品制備完成。
高品質的試劑，精確的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。其中正確的操作不僅僅是指實驗操作，樣本的處理也是至關重要的。