1. 烘片：60℃烘片0.5-2小時。

2. 脫蠟水化：烘片結(jié)束后，石蠟切片依次置于以下試劑中：

    1）二甲苯I：30 min

    2）二甲苯II：30 min

    3）100%乙醇：10 min

    4）95%乙醇：10 min

    5）80%乙醇：10 min

    6）70%乙醇：10 min

    7）自來水沖洗10 min

3. 抗原修復-微波爐抗原熱修復法（可選）：將組織切片轉(zhuǎn)移到沸騰的EDTA-Tris 溶液中使其完全浸透。低火加熱1min，停止加熱并靜置于微波爐中10min。然后再低火加熱3-4min，停止加熱，使EDTA-Tris 溶液在室溫自然冷卻。

4. PBST漂洗3次：去除殘留并浸泡在PBST中，在搖床中以40 RPM漂洗5 min，重復3次。

5. 阻斷內(nèi)源過氧化物酶：用3%-5% H₂O₂室溫孵育10min。

6. PBST漂洗3次：去除殘留并浸泡在PBST中，在搖床中以40 RPM漂洗5 min，重復3次。

7. 封閉：去除殘留，用5%BSA室溫孵育20 min。

8. 孵育FITC偶聯(lián)的抗體：去除殘留，選擇適當?shù)南♂尡壤♂孎ITC偶聯(lián)的抗體，每張片子100-200ul抗體覆蓋組織，4℃避光孵育過夜。

9. PBST漂洗3次：去除殘留并浸泡在PBST中，在搖床中以40 RPM漂洗5 min，重復3次。

10. 染核，用DAPI染核，每張片子100-200ul抗體覆蓋組織，閉光孵育15min。

11. 滴加50%PBS+50%的甘油后，立即在熒光顯微鏡下觀察。