隨著大氣污染、吸煙、工業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展導(dǎo)致的理化因子增多以及人口年齡老化等因素，呼吸系統(tǒng)疾病近年來(lái)有明顯增長(zhǎng)的趨勢(shì)。

由于呼吸疾病涉及的器官較多，包括氣管、支氣管及肺部等，單以肺部為例，所涉疾病就包括肺阻塞、肺纖維化、肺氣腫、哮喘等，下面，武漢云克隆將以大鼠/小鼠為模式動(dòng)物，介紹幾種常見(jiàn)的肺部疾病動(dòng)物模型。

1. 慢性阻塞性肺疾病

慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一種常見(jiàn)的以持續(xù)氣流受限為特征的、可預(yù)防可治療的疾病，致殘率和病死率很高。

    1.1 建模方法：

主要試劑：紅金龍香煙（湖北中煙工業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，烤煙型，每支含焦油量9mg、煙氣煙堿量0.7mg、煙氣一氧化碳量12mg），脂多糖（lipopolysaccharide，LPS，美國(guó)Sigma公司），TNF-alpha和IL-8 ELISA試劑盒cloud-clone公司）

SPF級(jí)Balb/c雌性小鼠，體重約20g。采用鼻腔滴入 LPS 加熏香煙的方法建立 COPD模型。

分別于第 1天、29天經(jīng)鼻腔滴入LPS（30μg/6μL）；第2-30 天（除第 29 天）采取熏香煙法：將小鼠放入自制的玻璃熏箱，10 支/次，30min/次，5d/周，持續(xù)4周。

    1.2 模型鑒定：

與對(duì)照組相比，模型組小鼠毛發(fā)無(wú)光澤，部分有脫毛現(xiàn)象、躁動(dòng)，熏煙時(shí)喜扎堆，倦怠蜷縮，汗出，腹部脹大，呼吸急促，出現(xiàn)點(diǎn)頭運(yùn)動(dòng)，甚者張口呼吸明顯。

    1.3 造模后續(xù)檢測(cè)：

    1.3.1 細(xì)胞因子檢測(cè)

最后一次煙熏完后 24 小時(shí)處死，1%戊巴比妥鈉（按 0.05mL/10g）腹腔麻醉小鼠，將小鼠腹主動(dòng)脈取血法取血1mL或支氣管肺泡灌洗液，室溫下放置2h后，2 000r/min離心20min，取血清，-20℃保存?zhèn)溆?。?ELISA 試劑盒操作步驟說(shuō)明檢測(cè)小鼠血清中 TNFα、IL-8 的含量。

結(jié)果顯示：與空白組對(duì)比，COPD小鼠血清中TNFa、IL-8有顯著增高。 

                                                                            圖1. COPD小鼠相對(duì)于空白組小鼠血清中TNFa和IL-8水平對(duì)比

    1.3.2 肺組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)。

腹腔麻醉小鼠后，開(kāi)胸暴露胸腔：取左側(cè)肺葉固定于 10%甲醛溶液24h，常規(guī)脫水石蠟包埋，切片行 HE 染色，光鏡下觀察。

結(jié)果顯示：空白對(duì)照組小鼠肺泡結(jié)構(gòu)清晰，肺泡大小均勻，氣道黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整，纖毛排列整齊；模型對(duì)照組小鼠部分肺泡壁塌陷，肺泡不規(guī)則擴(kuò)大并相互融合，形成肺大泡，肺間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)不同程度的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管黏膜上皮脫落，黏膜皺襞增多，突入管腔，纖毛黏縮，管腔變窄，符合 COPD 病理改變。

                                                                        圖2. COPD小鼠(右)相對(duì)于對(duì)照組小鼠（左）肺部組織HE染色對(duì)比

2. 大鼠肺氣腫模型

肺氣腫（emphysema），指終末細(xì)支氣管遠(yuǎn)端的氣道彈性減退，過(guò)度膨脹、充氣和肺容積增大或同時(shí)伴有氣道壁破壞的病理狀態(tài)。按其發(fā)病原因肺氣腫有如下幾種類型：老年性肺氣腫、代償性肺氣腫、間質(zhì)性肺氣腫、灶性肺氣腫、旁間隔性肺氣腫、阻塞性肺氣腫。

    2.1 建模方法:

SPF級(jí)SD雄性大鼠，體重約200～220g。10%水合氯醛麻醉后，行氣管插管，用1ml注射器抽吸事先配制的8%木瓜蛋白酶液（0.5ml/kg BW）注入，而后將大鼠直立，垂直旋轉(zhuǎn)大鼠，使藥物在肺內(nèi)均勻分布，而后放于加熱墊上維持體溫，待清醒后正常飼養(yǎng)。對(duì)照組動(dòng)物使用等體積的生理鹽水行氣管內(nèi)注射。

    2.2 模型鑒定及后續(xù)檢測(cè)：

于術(shù)后4周麻醉大鼠處死后，取左肺經(jīng)4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片進(jìn)行HE染色（厚度為3μm）。

結(jié)果顯示：模型組大鼠肺部組織有明顯水腫，且伴隨明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肺泡壁厚度增厚的情況。

                                                                        圖3. 肺氣腫模型小鼠(右)相對(duì)于對(duì)照組小鼠肺部組織HE染色對(duì)比

3. 肺動(dòng)脈高壓模型

肺動(dòng)脈高壓是指以肺血管阻力進(jìn)行性升高為主要特征，可導(dǎo)致右心負(fù)荷增大，右心功能不全，肺血流減少，而引起一系列臨床表現(xiàn)。根據(jù)有無(wú)相關(guān)病因或危險(xiǎn)因素將PH分為兩類：PPH和繼發(fā)性肺動(dòng)脈高壓(secondary pulmonary hypertension，SPH)。

    3.1 肺動(dòng)脈高壓大鼠模型建模方法：

SPF級(jí)SD雄性大鼠，體重約200～220g。將野百合堿（60mg/kg）用無(wú)水乙醇溶解與0.9NaCl生理鹽水按照1：4配成1%溶液（10mg/ml），按50~60mg/kg體重，于頸背部皮下一次性注射。4周后可建立肺動(dòng)脈高壓大鼠模型。

    3.2 模型鑒定及后續(xù)檢測(cè)：

                                                                圖4. 模型組大鼠(右)相對(duì)于對(duì)照組小鼠肺部動(dòng)脈血管HE染色對(duì)比