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文章題目： 腫瘤特異性T細(xì)胞不能根除淋巴瘤的起始B細(xì)胞！

要點(diǎn): 1. 在新構(gòu)建的小鼠模型中，腫瘤特異性T細(xì)胞缺失會(huì)增加B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生率；

2. 淋巴瘤的起始B細(xì)胞不能被免疫系統(tǒng)清除，使得依然有進(jìn)展成淋巴瘤的風(fēng)險(xiǎn)。

那么，讓我們一起來(lái)看一下作者是怎么進(jìn)行論證的！

第一步，建立B細(xì)胞淋巴瘤。

將未成年的攜帶TAg的LoxP-Tag小鼠分別和CD19-Cre或CD19-CreER^T2小鼠雜交，通過(guò)Cre/loxP介導(dǎo)的重組酶，TAg在B細(xì)胞系中特異性表達(dá)的開關(guān)被開啟。在CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠中，Cre重組酶的活性是持續(xù)性表達(dá)的，而CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠中的Cre重組酶的活性依賴于外源性的他莫昔芬。借助RFP熒光小鼠，分析了兩種Cre重組酶的重組率，結(jié)果顯示CD19-Cre較高。但以上驗(yàn)證僅是一種推斷，因?yàn)?/span>TAg和RFP轉(zhuǎn)基因插入的是不同的基因位點(diǎn)。為了評(píng)估CD19-Cre x LoxP-Tag和CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠產(chǎn)生的TAg對(duì)特異性CD8⁺ T細(xì)胞應(yīng)答的能力，進(jìn)行了四聚體技術(shù)分析和細(xì)胞胞毒實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠的CD8⁺ T細(xì)胞TAg耐受，如圖所示：

第二步，驗(yàn)證CD19-Cre x LoxP-Tag而不是CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠易發(fā)展成B細(xì)胞淋巴瘤。

根據(jù)第一步的結(jié)果我們很容易推斷，CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠易發(fā)展成B細(xì)胞淋巴瘤，而不是CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠。那么，作者從哪些方面進(jìn)行了驗(yàn)證呢？

通過(guò)比較CD19-Cre x LoxP-Tag和他莫昔芬誘導(dǎo)的CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠在B細(xì)胞淋巴瘤生存率和脾、淋巴結(jié)組織化學(xué)染色以及流式細(xì)胞分析脾細(xì)胞B細(xì)胞譜系標(biāo)志物和TAg表達(dá)情況。

結(jié)果顯示CD19-Cre x LoxP-Tag而不是CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠易發(fā)展成B細(xì)胞淋巴瘤并且生存率更低。其B細(xì)胞淋巴瘤生存率統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖：

B細(xì)胞淋巴瘤生發(fā)中心標(biāo)志物檢測(cè)陰性——該B細(xì)胞淋巴瘤為生發(fā)中心外B細(xì)胞起源

第三步，驗(yàn)證體外注射TAg⁺ B細(xì)胞是否具有致瘤性和免疫原性。

分別將攜帶淋巴瘤的CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠和無(wú)腫瘤LoxP-Tag對(duì)照同窩小鼠的1 x 10⁶個(gè)脾細(xì)胞靜脈內(nèi)注射到Rag^{- / -} 小鼠體內(nèi)。從生存曲線和脾臟大小進(jìn)行評(píng)估的結(jié)果如下圖：

以上結(jié)果說(shuō)明，體外注射 TAg⁺ B細(xì)胞具有致瘤性和免疫原性。

第四步，驗(yàn)證在TAg特異性T細(xì)胞缺失的情況下，淋巴瘤的發(fā)病率增加。

分別將CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag和CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠的B細(xì)胞或脾細(xì)胞靜脈注射到Rag^{- / -} 小鼠。比較CD19⁺ TAg⁺淋巴細(xì)胞百分比、生存率、B細(xì)胞淋巴瘤TAg⁺百分比，可得到結(jié)論：在TAg特異性T細(xì)胞缺失的情況下，淋巴瘤的發(fā)病率增加。

接下來(lái)分析內(nèi)源性TAg特異性CD8⁺ T細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)。

為了排除內(nèi)源性TAg特異性CD8⁺ T細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，比較LoxP-Tag和CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠的T細(xì)胞應(yīng)答情況并無(wú)顯著性差異，進(jìn)一步通過(guò)細(xì)胞胞毒實(shí)驗(yàn)證實(shí)TAg特異性的CTL應(yīng)答。

最后確定，TAg特異性T細(xì)胞不能根除淋巴瘤起始B細(xì)胞。

在淋巴瘤發(fā)展過(guò)程中，可以發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)他莫昔芬誘導(dǎo)的CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag所有的小鼠的血細(xì)胞中均能檢測(cè)到TAg mRNA。

在致癌基因誘導(dǎo)前一周，用TAg⁺的癌細(xì)胞免疫小鼠，結(jié)果表明盡管誘導(dǎo)了免疫應(yīng)答，但仍未能清除TAg起始B細(xì)胞，如下圖所示：

該結(jié)論也進(jìn)一步在脾、骨髓和腹膜腔中得到了證實(shí)。

迄今為止，對(duì)B細(xì)胞淋巴瘤與T細(xì)胞之間的相互作用知之甚少。研究者通過(guò)建立轉(zhuǎn)基因小鼠模型，誘導(dǎo)B細(xì)胞特異性的癌基因——SV40 T抗原（TAg）表達(dá)，研究腫瘤特異性T細(xì)胞在自發(fā)性B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)展中的作用。

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