實驗原理 

Superoxide Dismutase 3, Extracellular (SOD3)，是SOD同工酶的一種。SOD3以Cu2+、Zn2+為輔基，屬于CuZn SOD，可以消除體內(nèi)代謝產(chǎn)生的反應(yīng)氧族，抵御內(nèi)外環(huán)境中超氧離子的損傷。由于超氧陰離子自由基O2 - 壽命短，不穩(wěn)定，不易直接測定SOD活性，而采用間接的方法。本實驗采用鄰苯三酚自氧化法來間接測定，SOD的活性。鄰苯三酚在堿性條件下能迅速自氧化，生成有色中間產(chǎn)物，在325nm下吸光值增加，加入SOD酶后能抑制其自氧化的速率，從而間接測定SOD酶的活性。

實驗試劑及儀器

試劑：50mmol/L Tris-HCl，pH8.2

50mmol/L 鄰苯三酚，用10 mmol/L的HCl 溶解，避光    

儀器：島津UV1800紫外分光光度計

實驗步驟 

在25℃下，將900μl 50mmol/L Tris-HCl的緩沖液中加入30μl 50mmol/L 鄰苯三酚，迅速搖勻，以Tris-HCl的緩沖液為空白對照，在325nm下每隔30s測定一次OD值，共測6次，要求自氧化速率控制在0.070 OD/min。（比色皿的光經(jīng)為25px,可根據(jù)調(diào)整加入鄰苯三酚的體積來控制其自氧化速率）。調(diào)整好自氧化速率后，在900μl 50mmol/L Tris-HCl的緩沖液中加入一定量待測重組SOD酶液，預(yù)熱20min后，加入30μl 50mmol/L 鄰苯三酚，迅速搖勻，在325nm下每隔30s測定一次OD值，共測6次。在此條件下，每分鐘抑制鄰苯三酚自氧化率50%的酶量定義為一個活力單位U。

結(jié)果計算

A325/min為SOD抑制鄰苯三酚的自氧化速率；

0.93為反應(yīng)總體積；

V為加入待測酶液體積；

N為樣品稀釋倍數(shù)。

實驗結(jié)果

SOD單位活力（U/mg）=SOD單位活力（U/ml）/1ml酶液所含蛋白的量

重組人SOD3酶活為：121.4U/mg

重組小鼠SOD3酶活為：273.8U/mg