云克隆不僅可以開展正常周齡大、小鼠的相關(guān)實(shí)驗(yàn)，還可進(jìn)行以胎鼠、乳鼠、新生鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的相關(guān)實(shí)驗(yàn)，以及轉(zhuǎn)基因小鼠和基因敲除小鼠的繁殖，種群擴(kuò)大工作。

案例展示：

I. 先天性巨結(jié)腸相關(guān)性小腸結(jié)腸炎的動(dòng)物模型

先天性巨結(jié)腸相關(guān)性小腸結(jié)腸炎(HAEC)是先天性巨結(jié)腸的常見并發(fā)癥,是導(dǎo)致巨結(jié)腸患兒死亡的常見原因,發(fā)病率為5%～42%。

為了建立先天性巨結(jié)腸相關(guān)性小腸結(jié)腸炎的動(dòng)物模型, 由于采用了Ednrb-/-的基因敲除的鼠，雜合子和野生型鼠均為灰色，純合子就表現(xiàn)棕白色相間的花斑鼠（如圖1所示）。Ednrb-/-純合子小鼠由于末端結(jié)腸缺乏腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分布，在出生后出現(xiàn)嚴(yán)重的便秘及反復(fù)發(fā)作的HAEC，如不進(jìn)行干預(yù)一般在出生后3-4周死亡，是目前最常用的HSCR及HAEC動(dòng)物模型之一。

圖1.繁殖的 Ednrb-/-純合子小鼠（花斑鼠）與雜合子小鼠對(duì)比圖

云克隆動(dòng)物中心進(jìn)行了Ednrb-/-轉(zhuǎn)基因鼠的交配、繁殖和鑒定工作，圖1中的鼠即為我們生產(chǎn)動(dòng)物房所繁殖的轉(zhuǎn)基因鼠，并在轉(zhuǎn)基因鼠上進(jìn)行了一系列細(xì)胞治療先天性巨結(jié)腸病的研究。

II. 壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)大鼠模型

壞死性小腸結(jié)腸炎（NEC）是早產(chǎn)兒、低出生體重兒最常見急腹癥之一。該病的起病癥狀不典型，病情進(jìn)展快，死亡率高。目前國(guó)內(nèi)的NEC病死率約為10%~50%。因此，建立該疾病的動(dòng)物模型很有必要。

云克隆采用體重約5~10g的新生SD大鼠，在其出生48h內(nèi)母乳喂養(yǎng)，自由攝食，與母鼠同籠；出生后48h隨機(jī)分成模型組和對(duì)照組。對(duì)照組新生大鼠出生48h后繼續(xù)與母鼠同籠，鼠乳喂養(yǎng)，不進(jìn)行缺氧冷刺激。模型組新生大鼠出生48h后與母鼠分開，置入保育箱中并采用鼠乳代用品人工喂養(yǎng)，并定期給與缺氧冷刺激，以建立新生鼠壞死性小腸結(jié)腸炎動(dòng)物模型；具體建模方法如下：

1. 新生大鼠與母鼠分離，放置在保育箱內(nèi)(控制保育箱內(nèi)溫度28~30℃,濕度45%~65%)，采用鼠乳代用品喂養(yǎng)。采用5號(hào)靜脈留置針定時(shí)經(jīng)口插管喂養(yǎng)，第1天給予0.2ml/次，每4小時(shí)1次，隨后每24h增加0.2ml/次,48h后逐漸增至0.4ml。

2. 缺氧及冷刺激：將新生SD大鼠置入缺氧箱中，5%氧氣+95%氮?dú)?10分鐘，隨即打開缺氧箱，取出新生鼠，隨后將其置入冰箱冷藏室中，給予4℃刺激，持續(xù)10分鐘，結(jié)束后放回保育箱。每日2次，分別進(jìn)行一次缺氧+冷刺激，連續(xù)3d，最后一次缺氧+冷刺激后24h空腹斷頭處死大鼠，打開腹腔取出十二指腸下端至直腸上端的腸道組織。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組新生大鼠相比，NEC組新生大鼠明顯體型偏小（如圖2所示）：

圖2. NEC模型乳鼠及其對(duì)照的對(duì)比圖

III. 新生鼠腦白質(zhì)損傷

新生兒腦白質(zhì)損傷是一組具有多種病理類型的疾病，其病理特點(diǎn)主要包括反應(yīng)性星形膠質(zhì)化、髓鞘損害和軸突病變等，這些病變被認(rèn)為是腦癱發(fā)生的最重要的危險(xiǎn)因素。缺氧缺血或?qū)m內(nèi)感染等最終導(dǎo)致腦白質(zhì)組織的壞死、星形膠質(zhì)化、細(xì)胞凋亡以及囊腔形成等多種病理改變。

云克隆建立了新生兒腦白質(zhì)損傷的大鼠模型，具體方法如下：

將若干SD大鼠按照雌雄比=1:2進(jìn)行交配合籠，待其生下子代后，將6日齡乳鼠挑出，隨機(jī)分成模型組和對(duì)照組。模型組操作如下：

1)出生后6天的大鼠在冰上間接冷卻至對(duì)傷害性刺激無(wú)反應(yīng)時(shí)進(jìn)行深度麻醉；

2)用酒精清潔皮膚，在前頸部位做腹正中切后，在解剖顯微鏡下，通過(guò)輕輕收縮肩胛舌骨和胸鎖乳突肌的肌肉來(lái)接近右頸總動(dòng)脈分叉點(diǎn)；

4)頸動(dòng)脈鞘周圍筋膜被切除，從附近的走神經(jīng)和交感神經(jīng)處用鉤子分離近端內(nèi)支，將頸內(nèi)動(dòng)脈結(jié)扎；

5)結(jié)扎后，縫合皮膚切口，保持體溫（28℃及以上）直到完全清醒，然后放回大鼠；

6)頸部結(jié)扎1小時(shí)后，將動(dòng)物置于充滿氮?dú)獾拿芊庀洌?7℃），灌輸6%的氧氣，缺氧缺血感染組在缺氧環(huán)境中暴露80 min；

7)缺氧缺血感染組動(dòng)物放在電熱墊子上恢復(fù)30分鐘后，腹腔注射 (0.3 mg/kg) 的脂多糖；

8)以頸動(dòng)脈暴露，但是沒(méi)有結(jié)扎、無(wú)缺氧暴露、無(wú)LPS注射的大鼠為對(duì)照組。

武漢云克隆動(dòng)物有限公司(CCA)為云克隆科技股份有限公司(CCC)的全資子公司，其位于振華路33號(hào)的SPF繁殖動(dòng)物房面積220平方米，具有《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證》。

具有動(dòng)物繁殖資質(zhì)的屏障環(huán)境的動(dòng)物房，為云克隆進(jìn)行種群擴(kuò)大，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的繁殖，孕鼠和孕鼠的相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究及服務(wù)提供了有利的保障。