帕金森?。?/span>Parkinson’s disease,PD）是發(fā)生于老年人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性性疾病，臨床上以震顫、肌強直、運動遲緩為主要特征，并伴隨腦內(nèi)黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性死亡、紋狀體多巴胺神經(jīng)遞質(zhì)含量降低。本項目以MPTP誘導(dǎo)建立PD模型小鼠，通過特定藥物治療，觀察藥物對PD模型小鼠行為學(xué)、腦黑質(zhì)尼氏小體表達、酪氨酸羥化酶（TH）表達的影響。并在實驗終點，取腦部黑質(zhì)、紋狀體等組織進行基因組學(xué)的后續(xù)檢測。

實驗內(nèi)容：

SPF級C57／BL6雄性小鼠，鼠齡7-8周，體重20g左右；動物隨機分為三組

正常組、PD模型組、PD模型+藥物組

PD模型建模方法：

腹腔注射MPTP 20mg／kg／d，連續(xù)注射14天。對照組使用等體積生理鹽水進行腹腔注射，操作及注意事項相同。MPTP給藥結(jié)束后，模型建立成功。

藥物給以相應(yīng)的藥物處理；正常組、PD模型組使用等體積PBS進行腹腔注射，操作及注意事項相同。

檢測項目：

1.行為學(xué)檢測：

轉(zhuǎn)棒實驗：使用小鼠轉(zhuǎn)棒儀檢測小鼠的運動協(xié)調(diào)能力。

將小鼠置于直徑為75px的旋轉(zhuǎn)桿上，轉(zhuǎn)速調(diào)整為30r/min，每次同時測定5只小鼠，每個隔室中1只。記錄小鼠從轉(zhuǎn)棒開始轉(zhuǎn)動至掉落轉(zhuǎn)棒所經(jīng)歷的時間，測定時間為1min，每次中間休息1min，連續(xù)5 次，記錄1min 內(nèi)掉落次數(shù)。

曠場實驗：即自發(fā)活動，是檢測MPTP損傷后少動的常用指標。

曠場實驗所用實驗箱為尺寸：500×500×300mm曠場，周壁的顏色為黑色，曠場底面被平均分為16個4×4 個小方格。正上方架攝像頭，視野覆蓋整個曠場。將動物放置在正中央格，同時進行攝像和計時，時間為5 min。通過計算機示蹤分析系統(tǒng)來分析動物在一定時間內(nèi)的活動狀態(tài)。實驗室保持安靜，室溫為20 ℃左右，光線充足。觀察指標：方格間穿行次數(shù)（動物的四肢從一個格進入另一個格為穿行一次）、直立次數(shù)（動物雙前肢同時離地，或者雙前肢放在墻壁上算作直立一次）、中央格停留時間、穿過中央格的次數(shù)。

爬桿實驗：是評價小鼠運動協(xié)調(diào)能力的經(jīng)典方法。通過記錄小鼠由桿的頂端往下爬到底部（雙前爪著地）所需時間，比較其運動能力。本實驗將小鼠放置于一個木制的粗糙的小球上，其下端接有一個表面粗糙、截面為圓形的木棒，木棒下端放置于鼠籠里，當小鼠頭朝下方從木球爬至木棒上，用秒表記錄此刻的時間為 A，當其爬至木棒最下端時，記錄此刻的時間為 B，那么小鼠爬完整個木棒所用的時間為 C，C=A-B，每只小鼠測試倆次，將倆次爬桿的平均時間作為統(tǒng)計指標。

2. 腦組織尼氏體染色

取各組小鼠腦組織，經(jīng)固定液固定、石蠟包埋、切片后，進行尼氏小體染色。觀察各組動物腦組織中尼氏小體的數(shù)量。

3. 免疫組化檢測腦黑質(zhì)TH表達

取各組小鼠腦組織切片，修片至腦黑質(zhì)部位，進行免疫組化染色酪氨酸羥化酶的表達。

4.電鏡觀察腦部線粒體：電鏡下觀察小鼠腦部多巴胺能神經(jīng)元細胞超微結(jié)構(gòu)。低倍視野有基本完整的細胞結(jié)構(gòu)，高倍視野中要有線粒體線粒體特寫， MPP組可見鐵死亡線粒體：大小變小，雙層膜密度增高，外膜斷裂，脊減少或消失。

實驗結(jié)果：

 尼氏染色

免疫組化染色TH：TH免疫染色可來評估MPTP對小鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的毒性損傷作用。模型組小鼠腦組織切片ＴＨ陽性神經(jīng)元的數(shù)目較對照組明顯減少。