活性蛋白—粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)活性蛋白
GM-CSF是一種單體糖蛋白,作為一種細(xì)胞因子,可刺激干細(xì)胞產(chǎn)生粒細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞)和單核細(xì)胞。眾所周知,人紅系白血病細(xì)胞TF-1,白細(xì)胞介素3(IL-3)或粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)可促進(jìn)TF-1細(xì)胞增殖。因此,GM-CSF的活性可通過TF-1細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定的。據(jù)報(bào)道,GM-CSF也能誘導(dǎo)人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株U937分化。
實(shí)驗(yàn)方案-1
TF-1細(xì)胞作為待刺激細(xì)胞,用不同濃度rhGM-CSF與TF-1細(xì)胞在96孔微孔板中培養(yǎng),每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞,用CCK-8細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(cell Counting Kit-8)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果-1:
I 用GM-CSF(10ng/mL)孵育3d后,TF-1細(xì)胞較對(duì)照組明顯增殖(Figure 1)。
II 用GM-CSF(1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL)孵育3d后,用CCK-8法檢測(cè)TF-1細(xì)胞增殖情況,與對(duì)照組比較有顯著性差異(Table 1)。
實(shí)驗(yàn)方案-2
U937細(xì)胞作為待刺激細(xì)胞,用不同濃度的rhGM-CSF(1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL)與U937細(xì)胞共培養(yǎng),每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果-2 U937細(xì)胞與GM-CSF(10ng/mL)共培養(yǎng)5天后,可觀察到細(xì)胞形態(tài)變化,用GM-CSF(10ng/mL)刺激5天后,U937細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,具有樹突狀細(xì)胞的形態(tài)特征(Figure 2)。