2020年6月，來自溫州醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院的Kai-Fu Tang教授在“Theranostics”發(fā)表了題為“Rescuing Dicer expression in inflamed colon tissues alleviates colitis and prevents colitis-associated tumorigenesis”的文章。研究探討了惡性腫瘤發(fā)生前Dicer表達量能否在有炎癥的結腸組織中下調，而增加Dicer的表達量能否減輕結腸炎癥狀，預防結腸相關腫瘤的發(fā)生的問題。

                                                                                        產(chǎn)品：8-羥基脫氧鳥苷 ELISA Kit                        

                                                                                         貨號：CEA660Ge                                    

                                                                                         實驗方法：競爭抑制                                      

                                                                                         檢測范圍：74.07-6000 pg/mL

研究簡介：

Dicer是RNA干擾通路的重要組成部分，它對于miRNAs和siRNAs的生物合成至關重要。近來有研究發(fā)現(xiàn)，Dicer在腫瘤組織中表達量常常下調，并且Dicer突變增加了腫瘤的風險，尤其在肺，腎臟，乳腺和甲狀腺中。炎癥在結腸癌的發(fā)展中起重要作用。然而，Dicer表達在大腸桿菌相關癌變過程中的動態(tài)模式仍不清楚。

作者首先檢測了56例IBD患者（27例克羅恩病和29例潰瘍性結腸炎）和57例對照組石蠟包埋的結腸組織中Dicer的表達量。免疫化學結果顯示，與對照結腸組織相比，炎癥結腸組織中Dicer表達下調。作者使用另外46例IBD患者和34例對照組的冰凍炎癥結腸組織，發(fā)現(xiàn)Dicer在蛋白水平上下調，但在mRNA水平上沒有下調。此外，在DSS誘導的急性或AOM + DSS誘導的慢性結腸炎小鼠模型的炎癥結腸組織中，Dicer也在蛋白水平上下調，但在mRNA水平上沒有下調。這些發(fā)現(xiàn)表明在惡性腫瘤發(fā)生之前，Dicer在炎癥結腸組織中的表達是下調的。

因為炎癥會導致氧化脅迫，因此作者假設炎癥通過氧化脅迫來抑制Dicer表達。對人結腸上皮細胞系FHC，人結腸肌成纖維細胞系CCD-18Co以及人巨噬細胞系THP-1進行H₂O₂處理，發(fā)現(xiàn)H₂O₂可以抑制Dicer蛋白表達，但mRNA表達沒有變化，而加入N-acetyl-L-cysteine（NAC）之后，Dicer表達量上調。并且，對炎癥組織施用NAC后，8-OHdG在人和小鼠炎癥組織中含量增加。這表明氧化脅迫抑制了Dicer在炎癥結腸組織中的表達。

因為之前進行氧化脅迫處理發(fā)現(xiàn)，miR-215的表達與處理時間和劑量有關。作者通過雙熒光素實驗檢驗了Targetscan預測的3個miR-215和Dicer UTR區(qū)的結合位點，發(fā)現(xiàn)這三個位點都可以被miR-215抑制表達。瞬時轉染miR-215降低了Dicer蛋白表達，但mRNA表達量沒有影響。這些結果表明，氧化脅迫通過誘導miR-215來抑制Dicer的表達。然后，作者研究了炎癥結腸組織中的氧化應激是否通過誘導miR-215的表達抑制Dicer的表達。發(fā)現(xiàn)miR-215在小鼠炎癥結腸組織中上調，并與人炎癥結腸組織中的8-OHdG含量成正相關。

之后，作者通過彗星實驗和γ-H2AX抗體免疫染色發(fā)現(xiàn)敲除Dicer基因的細胞DNA更易受到氧化脅迫帶來的損傷。細胞增殖和凋亡實驗則顯示敲除Dicer基因的細胞對氧化脅迫處理更敏感。在H₂O₂處理下，敲除Dicer的細胞中細胞質DNA增加以及IL-6表達上升。并且，Dicer表達的降低增強了DSS誘導的結腸炎，促進了大腸組織癌變。

作者分別使用阿那曲唑，小檗堿，普拉洛芬來增強Dicer的表達，發(fā)現(xiàn)增強表達的細胞對H₂O₂誘導的DNA損傷更敏感，且能減少H₂O₂處理引起的細胞質DNA和IL6的增加。在小鼠結腸炎模型中，增加表達量的Dicer可以緩解炎癥的發(fā)展并且抑制相關腫瘤的發(fā)生。

結腸癌是大腸黏膜上皮和腺體發(fā)生的惡性腫瘤，屬于一種常見的惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率都位居各類癌癥前列。從世界衛(wèi)生組織公布的數(shù)據(jù)來看，近年來結腸癌的發(fā)病率逐步上升并呈年輕化。隨著對結腸癌研究的深入，新的生物標志物的發(fā)現(xiàn)，不僅對結腸癌的病理診斷提供了很大幫助，并為其預后判斷、治療方案的選擇提供新的證據(jù)。

云克隆提供多個結腸癌檢測標志物的蛋白、抗體以及 ELISA 試劑盒產(chǎn)品，廣泛的應用于人、小鼠、大鼠、豬、羊等多個物種的檢測。

結腸炎小鼠模型

動物品系：SPF 級 Balb/C 小鼠，雄性，周齡為 4w-6w，體重為 20g-22g。

建模方法：

1. 小鼠術前 12 h 禁食，自由飲水。

2. 腹腔麻醉小鼠，小鼠取頭低尾高體位，將聚乙烯導管經(jīng)肛門緩慢插入結腸 75px 并經(jīng)其注入 5％乙酸 0．4 mL，捏緊小鼠肛門倒提 30 s 后，注入生理鹽水 lmL 沖洗，正常組注入等量生理鹽水對照，造模結束后讓小鼠平躺，自然清醒，常規(guī)飼養(yǎng)。

3. 7d后摘眼球取血，靜止 30min，4℃離心機 3000r/min離心 10min，分離出上層血清，置 -80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?處死小鼠，取出肛門至盲腸末端的整個結腸和直腸段，預冷生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干，肉眼觀察各組小鼠結腸的大體改變，測量結腸長度及記錄濕重。剪取病變最嚴重的結腸 1 cm，4％多聚甲醛固定，石蠟包埋切片 ( 厚 4um)，HE 染色。觀察病理改變，其余結腸置于～ 80℃冰箱備用。