實(shí)驗(yàn)原理：

肌酸激酶BB(CK-BB)是一種肌酸激酶。CK-BB由兩個(gè)完全相同的腦型CKB亞單位組成的同二聚體，是一種參與細(xì)胞能量穩(wěn)態(tài)的細(xì)胞質(zhì)酶，其某些部分與細(xì)胞膜、ATP酶和細(xì)胞內(nèi)多種需要ATP的酶結(jié)合。此外，肌酸激酶M(CKM)已被鑒定為CKB的相互作用因子。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)結(jié)合ELISA檢測(cè)重組人CK-BB和重組人CKM的相互作用。

實(shí)驗(yàn)試劑：

APC030Hu01  Active Creatine Kinase B (CK-BB)

實(shí)驗(yàn)方法：

用含有0.01% BSA的PBS（pH 7.4）梯度稀釋CK-BB。將100μL樣品移入CKM蛋白預(yù)包被酶標(biāo)板中，37℃孵育2小時(shí)。棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗滌。除去洗液，加入抗CK-BB pAb孵育1小時(shí)，棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗孵育后，棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。加入底物溶液后，在37℃下孵育15-25分鐘。最后，向孔中加入50μL終止液，立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度。CK-BB和CKM的結(jié)合活性如圖1所示，這種作用呈劑量依賴性。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

圖1. CK-BB與CKM的結(jié)合活性。

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