兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)活性蛋白

兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）是幾種降解兒茶酚胺（如多巴胺、腎上腺素和去甲腎上腺素）、兒茶膽固醇以及具有兒茶酚結(jié)構(gòu)的各種藥物和物質(zhì)的酶之一。COMT有兩種亞型：可溶性短型（S-COMT）和膜結(jié)合長(zhǎng)型（MB-COMT）。COMT在內(nèi)源性兒茶酚胺神經(jīng)遞質(zhì)、兒茶酚雌激素和異生分子的分解代謝中起重要作用。其通過向兒茶酚胺引入一個(gè)甲基，而導(dǎo)致兒茶酚胺神經(jīng)遞質(zhì)（多巴胺、腎上腺素和去甲腎上腺素）的失活。兒茶酚胺甲基化的供體是S-腺苷甲硫氨酸（SAM）。任何具有兒茶酚結(jié)構(gòu)的化合物，如兒茶膽固醇和含有兒茶酚的類黃酮，都是COMT的底物。此外，UDP葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶2家族多肽B1（UGT2B1）已被鑒定為COMT的相互作用因子，因此采用結(jié)合ELISA法檢測(cè)重組人COMT與重組人UGT2B1的相互作用。

實(shí)驗(yàn)?zāi)康? UDP葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶2家族多肽B1（UGT2B1）被鑒定為COMT的相互作用因子，因此采用ELISA法檢測(cè)重組人COMT與重組人UDP葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶2家族多肽B1（UGT2B1）的相互作用。

實(shí)驗(yàn)步驟： 用含有0.01%BSA的PBS（pH 7.4）梯度稀釋COMT。將100uL樣本移入U(xiǎn)GT2B1蛋白預(yù)包被的酶標(biāo)板中，37℃反應(yīng)2小時(shí)。棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。加入抗COMT的pAb后孵育1小時(shí)，棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。再加入HRP標(biāo)記的二抗孵育后，棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。加入底物溶液，在37℃孵育15-25分鐘。最后，向孔中加入50μL終止液，并立即在450nm下讀數(shù)。 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果： COMT與UGT2B1的結(jié)合活性如Figure 1所示。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論： COMT可與UGT2B1結(jié)合，且這種作用呈劑量依賴性。 

云克隆兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）活性蛋白貨號(hào)：APJ365Hu01