今年7月22日，《Science》發(fā)表了一篇歷時六個月的調(diào)查報告，指稱美國明尼蘇達大學(xué)神經(jīng)學(xué)家Sylvain Lesné發(fā)表的20余篇論文存在學(xué)術(shù)不端行為。其中最引人注目的一篇是2006年在《Nature》上發(fā)表的，被引用量高達2300多次的阿爾茲海默癥的開創(chuàng)性論文，Sylvain Lesné與團隊成員發(fā)現(xiàn)了一種之前未知的β淀粉樣蛋白亞型（Aβ*56）。該文章的通訊作者Ashe教授將Aβ*56稱為在阿爾茨海默研究中，首個從大腦組織中發(fā)現(xiàn)，且能導(dǎo)致記憶衰退的物質(zhì)。該論文的造假可能導(dǎo)致了對阿爾茨海默癥淀粉樣蛋白假說長達16年的誤導(dǎo)性研究，從那時起，許多工作都集中在淀粉樣蛋白上，進展非常緩慢。

                                                                                        圖1.2006年發(fā)表在《Nature》的阿爾茲海默癥開創(chuàng)性論文被引用量

據(jù)統(tǒng)計，自2006年到2021年，美國NIH《美國國立衛(wèi)生研究院》對于“淀粉樣蛋白、寡聚體、阿爾茨海默癥”研究經(jīng)費從幾乎為零，猛增到了近3億美元。僅在2022年，NIH在涉及淀粉樣蛋白的項目上花費了約16億美元（約合108.14億人民幣），約占阿爾茨海默癥總資金的一半。

阿爾茨海默癥（Alzheimer Disease，AD）是一種起病隱匿的進行性發(fā)展的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，臨床上以記憶障礙、失語、失用、失認、視空間技能損害、執(zhí)行功能障礙以及人格和行為改變等全面性癡呆表現(xiàn)為特征，病因迄今未明。據(jù)世衛(wèi)組織統(tǒng)計，目前全球有超過5500萬人患有癡呆癥，給社會和家庭帶來巨大的負擔，對阿爾茨海默癥的研究迫在眉睫。

云克隆可為阿爾茨海默癥的疾病模型提供可靠的操作保證：

模型來源：通過腦立體定位技術(shù)向雙側(cè)海馬CA1區(qū)注射干擾物質(zhì)（供試品）

建模方案：SD大鼠采用1%戊巴比妥鈉40μg/g腹腔內(nèi)注射麻醉，麻醉后繼而固定于腦立體定位儀上。按照大鼠腦立體定位圖譜，以前囟為零起點，前囟后3.5 mm處為穿刺點，中線右側(cè)旁開2mm，而后牙科鉆鉆開顱骨，采用微量注射器自腦表面垂直進針3mm，即：（AP= -3.5 mm, ML=2.0 mm, DV=3.0 mm），雙側(cè)海馬CA1區(qū)緩慢勻速注射，留針5 min，退針后縫合傷口。

                                                                                                                              圖2.腦立體定位注射操作

Morris水迷宮作為AD模型的經(jīng)典行為學(xué)實驗，也被稱為AD模型行為學(xué)檢測的“金標準”。

云克隆引進的Morris水迷宮實驗系統(tǒng)，由圓形水池、圖像自動采集和處理系統(tǒng)組成。圖像自動采集和處理系統(tǒng)主要由攝像機、計算機、圖像監(jiān)視器組成，動物入水后啟動監(jiān)測裝置，記錄動物運動軌跡，實驗完畢自動分析報告相關(guān)參數(shù)。

                                                                                                                                圖3. Morris水迷宮圓形水池

1. Morris水迷宮圓形水池　

Morris水迷宮圓形水池為一圓柱形水桶，直徑為3000px（小鼠）、高為50-1500px，水池水深為30-1000px，一個圓形平臺直徑約為225px（小鼠），藏匿于25px的水面之下。水池的內(nèi)部不得有任何標記，在圓桶的上緣等距離地設(shè)東、南、西和北4個標記點，作為動物進水池的入水點，以這4個入水點在水面和水桶底部的投影點作為參照位點，將水面和水桶部分均等的分為4個象限，按實驗要求，可任意地將平臺設(shè)置于某一象限的中間。適當?shù)暮銣卦O(shè)備使水溫保持在23～25℃。

2. 水迷宮圖像自動采集和處理系統(tǒng)　

本系統(tǒng)能自動地采集動物的入水位置、游泳的速度、搜索目標的所需時間和運行軌跡等參數(shù)，并可對所采集的各種數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計和分析。

                                                                                                                                      圖4. Morris水迷宮視頻界面

實驗步驟

3. Morris水迷宮實驗步驟

連續(xù)給予受試物后，實驗前一天,小鼠自由游泳2min以熟悉環(huán)境，其間引導(dǎo)動物站上平臺10s。次日開始訓(xùn)練，訓(xùn)練期間繼續(xù)給樣。

定位航行試驗：用于測量實驗動物對水迷宮學(xué)習(xí)和記憶獲得的能力。動物每次從1個象限的相同入水點入水，將動物面向池壁放入水中，儀器自動記錄動物尋找并爬上平臺的路線圖、動物從入水到找到水下隱蔽平臺并站立其上所需時間(逃避潛伏期)及游泳總路程。每完成4個象限的訓(xùn)練當做1個循環(huán)，如果動物在90s內(nèi)未找到平臺，則需將其引至平臺，這時潛伏期以90s計，讓動物在平臺停留10s后，再放回籠中。如此重復(fù)完成4個象限的試驗，總共訓(xùn)練5天，也就是四個循環(huán)，象限選擇和各實驗組動物訓(xùn)練順序應(yīng)隨機確定或交叉進行。

空間探索試驗：定位航行試驗結(jié)束5天后，將水下平臺撤除，按照定位航行試驗的方法重復(fù)1個循環(huán)（共4個象限）的試驗，動物每次從1個象限的入水點入水，記錄90s內(nèi)小鼠在水池4個象限中的游泳距離、路徑、時間，據(jù)此推算平臺所在象限數(shù)據(jù)占總距離、總時間的百分比及穿越平臺的次數(shù)，用來反映大鼠對平臺所在位置的空間記憶能力，以判斷動物記憶儲存及提取再現(xiàn)能力。

4. 數(shù)據(jù)處理

將每天動物1個循環(huán)（共4個象限）的實驗數(shù)據(jù)合并統(tǒng)計，對每1個循環(huán)各組的結(jié)果進行比較分析。

逃避潛伏期、上臺前游泳路程、平臺象限活動時間占總時間百分比、平臺象限活動路程占總距離百分比、站臺穿越次數(shù)屬計量資料，可用unpaired T test進行差異性分析。結(jié)論：NS，組間差異無顯著性；*（P<0.05），組間5%的顯著性差異；**（P<0.01），組間1%的顯著性水平顯著；***（P<0.001），組間1‰的顯著性差異。

針對學(xué)習(xí)與記憶行為學(xué)檢測方面，云克隆還可為廣大用戶提供：