2023年8月16日，澳大利亞哈德遜醫(yī)學(xué)研究所及蒙納士大學(xué)的研究團(tuán)隊在《Nature》期刊發(fā)表了題為“Interferon-ε is a tumour suppressor and restricts ovarian cancer”的文章。該研究表明：IFNε在輸卵管上皮細(xì)胞（高級別漿液性卵巢癌的起源細(xì)胞）中組成性表達(dá)，然后在這些腫瘤的發(fā)展過程中消失。IFNε抗腫瘤活性機制直接作用于腫瘤細(xì)胞，激活抗腫瘤免疫。IFNε能激活抗腫瘤T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞，阻止髓源性抑制細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的積累和激活。

高級別漿液性卵巢癌（HGSOC）是卵巢癌的最常見形式，生存率較低（低于50%），因其出現(xiàn)時間較晚，伴有廣泛的腹膜轉(zhuǎn)移和化學(xué)耐藥性，急需新的治療方法。IFNε是I型IFN家族抗腫瘤細(xì)胞因子的一員，在女性生殖道（FRT）上皮中表達(dá)，調(diào)節(jié)對感染的免疫，但其抗腫瘤活性尚不清楚。IFNε可結(jié)合受體IFNAR1和IFNAR2激活JAK-STAT信號通路。從機制上講，IFNε的獨特特性體現(xiàn)在其對衣原體感染的保護(hù)中，它通過直接的抗微生物作用和調(diào)節(jié)局部粘膜免疫反應(yīng)（在這種情況下是自然殺傷細(xì)胞）來抵抗衣原體感染。這與傳統(tǒng)的I型IFNs（IFNα和IFNβ）形成鮮明對比，后者通過與T細(xì)胞相關(guān)的不同機制驅(qū)動衣原體感染的發(fā)病機制。事實上，IFNε與傳統(tǒng)IFNs有許多不同之處，包括其上皮表達(dá)、激素調(diào)控及缺乏模式識別受體通路的調(diào)節(jié)，這些通路誘導(dǎo)傳統(tǒng)IFNs對病原體或癌癥中可能產(chǎn)生的“危險”信號做出反應(yīng)。而這篇研究證明了IFNε具有保守的、跨物種的內(nèi)在抗腫瘤特性，它在輸卵管上皮中組成性表達(dá)，在卵巢腫瘤發(fā)生中表達(dá)缺失，證明IFNε是一種獨特的腫瘤抑制因子。

免疫組化（IHC）染色顯示IFNε在所有健康女性的FT上皮細(xì)胞中均有表達(dá)。這種IFNε蛋白表達(dá)模式在小鼠輸卵管中是保守的，并且只檢測到IFNε在上皮表達(dá)，其他IFNs幾乎沒測到。IFNε在低級別漿液性卵巢癌（LGSOC）和高級別漿液性卵巢癌（HGSOC）中表達(dá)水平顯著降低。同樣，在健康的FT上皮或腫瘤中均未檢測到其他IFNs。用卵巢癌細(xì)胞系ID8建立了原位、同基因的HGSOC臨床前模型。在注射細(xì)胞后，腫瘤在FT附近生長為“原發(fā)”腫瘤，并轉(zhuǎn)移到腹膜腔，形成出血性腹水，繼發(fā)性腫瘤沉積在橫膈膜、腹膜壁和腸系膜上，類似于患有HGSOC的女性。結(jié)果表明，與野生型小鼠相比，在注射后6周，Ifne ^-/-小鼠的腫瘤擴散和腹腔轉(zhuǎn)移性生長顯著增加。在Ifne ^-/-小鼠中，某些腹膜免疫細(xì)胞群的總數(shù)也有所升高。這些數(shù)據(jù)表明IFNε具有許多內(nèi)源性腫瘤抑制因子的特征。（見圖1）

圖1. IFNε在HGSOC中表達(dá)水平下降

（文中所有圖片均來源于《Nature》雜志）

為了進(jìn)一步了解IFNε的內(nèi)在抗腫瘤特性和其潛在機制，研究者研究了重組IFNε在幾個臨床前模型中的作用。在ID8模型中，注射重組小鼠IFNε，蛋白呈劑量依賴性顯著抑制腹膜轉(zhuǎn)移瘤的生長。接種3天后注射IFNε抑制了這些“正在發(fā)展”的腫瘤。將IFNε處理的開始時間延遲4周以允許原位腫瘤形成，結(jié)果顯示IFNε的總體療效沒有降低。為了研究IFNε對腹膜轉(zhuǎn)移的影響，研究者在晚期卵巢癌模型中建立了腹膜轉(zhuǎn)移模型，將ID8腫瘤細(xì)胞直接注射到腹膜腔中，之后它們在腹膜壁、腹膜器官和腸系膜上形成廣泛的腫瘤沉積物，以及出血性惡性腹水，反映了女性晚期卵巢癌的表現(xiàn)。在該模型中，IFNε同樣有效地抑制高腫瘤負(fù)荷，減少腹腔腫瘤生長和惡性出血性腹水的發(fā)展。（見圖2）

圖2. IFNε抑制發(fā)展中、已建立和晚期卵巢癌腹膜轉(zhuǎn)移模型

從ID8模型小鼠中回收了經(jīng)IFNε或PBS處理的腹膜滲出細(xì)胞（PECs），并將其與ID8細(xì)胞一起體外孵育。觀察到ID8細(xì)胞與ifnε處理小鼠的腹膜細(xì)胞一起孵育后，細(xì)胞毒性CD8 ⁺ T和自然殺傷細(xì)胞的CD107a表達(dá)增加。IFNε顯示出劑量依賴性誘導(dǎo)ID8細(xì)胞凋亡。通過xCELLigence和MTT檢測，IFNε也顯示出劑量依賴性的抗增殖作用。與上述在體內(nèi)腫瘤模型中的觀察結(jié)果一致，在體外實驗中，IFNε比IFNβ更有效。然而，這些ID8腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析表明，IFNε并不是通過不同的基因介導(dǎo)這種作用，而是誘導(dǎo)了與IFNβ相同的基因，但其效力更高。隨后，研究者研究了缺乏Ifnar1小鼠的腫瘤發(fā)展，Ifnar1編碼所有I型IFNs的受體。在該模型中，宿主Ifnar1^?/?細(xì)胞，包括免疫細(xì)胞，不能直接對IFNε產(chǎn)生應(yīng)答，只有移植的Ifnar1 ^+/+ ID8腫瘤細(xì)胞才有應(yīng)答。重組小鼠IFNε抑制了野生型和Ifnar1^?/?小鼠的總體腫瘤轉(zhuǎn)移負(fù)荷。Ifnar1 ^{- / -}小鼠腫瘤的顯著減少表明IFNε對腫瘤細(xì)胞有直接作用，腫瘤細(xì)胞是唯一能夠?qū)?/span>IFN產(chǎn)生反應(yīng)的細(xì)胞。然而，Ifnar1 ^{- / -}小鼠的腫瘤抑制綜合評分明顯低于野生型小鼠（約50%），表明在野生型小鼠中，IFNε抗腫瘤的間接作用（如抗腫瘤免疫應(yīng)答）顯著促進(jìn)了IFNε的抗腫瘤作用。這些數(shù)據(jù)表明，IFNε能激活抗腫瘤免疫細(xì)胞，它也直接通過腫瘤細(xì)胞發(fā)揮其抗腫瘤作用。（見圖3）

圖3. IFNε抗腫瘤活性的機制

由于上述研究確定了IFNε在體外對腫瘤細(xì)胞的直接作用，研究者用初級HGSOC的兩種病人來源腫瘤異種移植（patient-derived xenograft，PDX）模型（PDX183和PDX111）來測試在活體中，人IFNε對人腫瘤的直接作用。腫瘤移植到NSG小鼠中，將小鼠隨機分為兩組，分別接受重組人IFNε或PBS治療，每周3次，持續(xù)6周。最后一次注射IFNε后24小時收集腹膜腫瘤細(xì)胞進(jìn)行RNA測序分析，結(jié)果顯示在HGSOC PDX111中誘導(dǎo)了強烈的應(yīng)答反應(yīng)，得到IFNε誘導(dǎo)（n = 105）和抑制（n = 11）基因，在HGSOC PDX183中，IFNε不調(diào)節(jié)基因表達(dá)，因此，從該模型衍生的腫瘤對IFNε的腫瘤生長抑制作用具有抗性。這兩種腫瘤都有TP53突變，BRCA1和BRCA2沒有突變，然而PDX183在RAD51C啟動子上表現(xiàn)出純合甲基化。接下來，研究者使用了晚期轉(zhuǎn)移性ID8模型，其中Trp53和Brca2基因突變被CRISPR（ID8 ^TB）引入，更接近于人類腫瘤。在這個晚期HGSOC的同基因模型中，IFNε顯示出對腫瘤生長高度有效的劑量依賴性抑制。通過1000 IU IFNε治療，腹膜液中的“游離”腫瘤細(xì)胞幾乎完全被消除。這些數(shù)據(jù)還表明，常見致癌基因Trp53和Brca2的突變不影響對IFNε的反應(yīng)。用500 IU IFNε治療可顯著降低腫瘤生長，減少了約50%的腹膜淋巴細(xì)胞和骨髓細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)量，MDSCs（髓源性抑制細(xì)胞）幾乎完全消除。在剩余的細(xì)胞中，IFNε增加了活化的抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞的比例，如CD8 ⁺和CD4 ⁺ T細(xì)胞和表達(dá)活化標(biāo)志物CD69和PD-1的自然殺傷細(xì)胞。（見圖4）

圖4. IFNε對晚期卵巢癌HGSOC PDX模型及ID8 ^TB模型的影響

為了確定激活的抗腫瘤免疫細(xì)胞在體內(nèi)對IFNε反應(yīng)的有效程度，研究者使用CRISPR-Cas9技術(shù)生成了Ifnar1^?/?ID8 ^TB細(xì)胞系。然后，使用這種ifnar1缺失的腫瘤細(xì)胞系研究重組小鼠IFNε在晚期腹膜轉(zhuǎn)移模型中的活性，其中只有宿主細(xì)胞會直接對IFN產(chǎn)生反應(yīng)。令人驚訝的是，這些Ifnar1^?/?ID8 ^TB腫瘤被清除的效果與Ifnar1野生型（ID8 ^TB）細(xì)胞一樣有效，表明IFNε的完全抗腫瘤作用可能是免疫介導(dǎo)的。為了進(jìn)一步闡明抗腫瘤免疫的機制，研究者分析了野生型ID8 ^TB或Ifnar1^?/?ID8 ^TB腫瘤小鼠的腹膜免疫細(xì)胞，MDSCs再次顯著降低至接近零。與非荷瘤小鼠相比，荷瘤小鼠CD45 ⁺免疫細(xì)胞中的Ki67表達(dá)降低，IFNε處理后Ki67表達(dá)得以恢復(fù)。同樣，在荷瘤小鼠中，CD8 ⁺ T細(xì)胞上CD25的表達(dá)降低，但IFNε顯著增加了該激活標(biāo)記物的表達(dá)。相反，上調(diào)的PD-1在調(diào)節(jié)性T（T _reg）細(xì)胞上的表達(dá)被IFNε降低，與之前的結(jié)果一致。總之，用IFNε處理野生型ID8 ^TB或Ifnar1 ^{- / -} ID8 ^TB腹膜腫瘤導(dǎo)致免疫環(huán)境建立，在這種環(huán)境中，抗腫瘤免疫的負(fù)調(diào)節(jié)因子（MDSCs和T細(xì)胞）被強烈抑制，但激活的、增殖的T細(xì)胞抗腫瘤免疫標(biāo)志物被誘導(dǎo)表達(dá)，導(dǎo)致疾病負(fù)擔(dān)顯著減輕。（見圖5）

圖5. 在ID8 ^TB晚期卵巢癌模型中，IFNε對IFN反應(yīng)性和非反應(yīng)性腫瘤細(xì)胞同樣有效

綜上，IFNε在女性生殖道中是一種固有的腫瘤抑制因子，在HGSOC中，它對免疫細(xì)胞有直接作用，還可通過來自腫瘤細(xì)胞的因子進(jìn)行間接免疫調(diào)節(jié)，表明它用于卵巢癌新的治療方法中的前景可觀。

云克隆開發(fā)了與該研究相關(guān)的靶標(biāo)產(chǎn)品，部分指標(biāo)節(jié)選如下：

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