系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的臨床表現(xiàn)從輕微的皮膚和/或關(guān)節(jié)癥狀到危及生命的病變不等。盡管許多SLE的表現(xiàn)可以歸因于I型干擾素（IFN）的活性，但在臨床試驗(yàn)中阻斷這一途徑只能提供部分緩解，這表明還有其他潛在的治療靶點(diǎn)。2024年10月，《Immunity》雜志上發(fā)表了一篇題為“Type I IFN drives unconventional IL-1β secretion in lupus monocytes”的文章，在這項(xiàng)研究中，研究者發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)性紅斑狼瘡單核細(xì)胞會(huì)同時(shí)產(chǎn)生IFN和白細(xì)胞介素-1b（IL-1b），細(xì)胞質(zhì)對(duì)線粒體核酸的感知會(huì)誘導(dǎo)黏液病毒抗性蛋白（MxA）的產(chǎn)生，這使得IL-1b的分泌獨(dú)立于消皮素D（GSDMD）和細(xì)胞焦亡。

從SLE或幼年型皮肌炎（JDM）患者中分離出的巨噬細(xì)胞廣泛表達(dá)MxA，高達(dá)60%的SLE巨噬細(xì)胞共表達(dá)IL-1b。免疫熒光（IF）結(jié)果顯示，單個(gè)的SLE 巨噬細(xì)胞在存活狀態(tài)下就能釋放成熟IL-1b（mIL-1b），這表明體外培養(yǎng)的SLE巨噬細(xì)胞在未發(fā)生細(xì)胞死亡的情況下就準(zhǔn)備好分泌mIL-1b。IL-1b⁺MxA⁺ Mos（血液?jiǎn)魏思?xì)胞）主要存在于攜帶循環(huán)Mito⁺ RBCs（保留線粒體的紅細(xì)胞）的患者中。這些Mos中有50%顯示細(xì)胞質(zhì)染色為紅細(xì)胞標(biāo)志物糖蛋白A（GPA），這提示紅細(xì)胞被內(nèi)化。通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量了血液Mos內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)GPA，在SLE患者的CD14⁺ Mos亞群中主要觀察到GPA，該亞群也是表達(dá)IL-1b和MxA的主要群體。這些數(shù)據(jù)表明IL-1b⁺MxA⁺ Mos是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的生物標(biāo)志物。（見圖1）

研究者發(fā)現(xiàn)Mito⁺ RBCs會(huì)誘導(dǎo)干擾素刺激基因（ISG）轉(zhuǎn)錄的上調(diào)。在Mito⁺ RBC處理過的Mos細(xì)胞的上清液中，IFN產(chǎn)生的標(biāo)志物C-X-C基序趨化因子配體10（IP-10）和IL-1b濃度均顯著增加。通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)，全細(xì)胞裂解物（WCL）檢測(cè)到MxA，同時(shí)在上清液中檢測(cè)IL-1b。在骨髓（BM）Mos細(xì)胞，同時(shí)檢測(cè)到IP-10和IL-1b。為了揭示這種雙重細(xì)胞因子產(chǎn)生的機(jī)制，研究者使用BLaER1 Mos并且生成了缺乏線粒體核酸（mtNAs）的紅細(xì)胞（ρ⁰ Mito⁺ RBCs），ρ⁰ Mito⁺ RBCs處理的BLaER1 Mos，IP-10和IL-1b表達(dá)量顯著減少，表明Mito⁺ RBC衍生的mtNAs是這種反應(yīng)的主要驅(qū)動(dòng)因素。研究人員發(fā)現(xiàn)在響應(yīng)Mito⁺ RBCs時(shí)，Gas^-/-或Sting1^-/- BLaER1 Mos中IP-10的表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組降低。另外，細(xì)胞質(zhì)mtDNA也能激活NLRP3炎性小體，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Nlrp3^-/-、Casp1^-/-和Pycard^-/-或者對(duì)該通路的藥理阻斷，也能顯著減少IL-1b的產(chǎn)生。（見圖2）

為了激活cGAS和 NLRP3，Mito⁺ RBC衍生的mtDNA必須離開吞噬溶酶體并到達(dá)胞質(zhì)。研究者將Mito⁺ RBCs^EdU和BLaER1 Mos共培養(yǎng)，IF分析顯示存在溶酶體相關(guān)膜蛋白1（LAMP1）EdU⁺斑點(diǎn)，說明Mito⁺ RBC衍生的mtDNA LAMP1⁺逃逸且吞噬溶酶體并到達(dá)細(xì)胞質(zhì)。Mito⁺ RBCs^BrdU和BLaER1 Mos共培養(yǎng)，免疫沉淀發(fā)現(xiàn)在cGAS免疫復(fù)合物（ICs）中檢測(cè)到BrdU信號(hào)，NLRP3 ICs中未檢測(cè)到BrdU信號(hào)，這表明Mito⁺ RBC衍生的mtDNA不太可能是激活NLRP3 的配體。（見圖3）

之后，研究人員對(duì)NLRP3免疫復(fù)合物相關(guān)的DNA進(jìn)行RT-qPCR分析，結(jié)果顯示線粒體擴(kuò)增子富集，且僅在D環(huán)區(qū)域擴(kuò)增子中富集，這表明D環(huán)區(qū)可以調(diào)節(jié)mtDNA對(duì)cGAS或NLRP3的親和力。Mito⁺ RBCs與BLaER1 Mos^EdU共培養(yǎng)，IF分析顯示細(xì)胞質(zhì)中存在mtDNA的積累。在mtRNA聚合酶抑制劑放線菌素D26的情況下Mito⁺ RBCs無(wú)法促進(jìn)IL-1b的產(chǎn)生，這表明是Mito⁺ RBCs的mtRNA驅(qū)動(dòng)了這種反應(yīng)。在缺乏RLRs（Rigi^-/-和Ifih1^-/-）的BLaER1 Mos 細(xì)胞中，與NLRP3 結(jié)合的mtDNA水平、Casp1的激活以及IL-1b的分泌均減少，這支持了它們協(xié)同感知細(xì)胞質(zhì)mtRNA的觀點(diǎn)。（見圖4）

研究者用Mito⁺ RBC 或聚肌胞誘導(dǎo)的BLaER1 Mos并未顯示出孔隙形成的跡象。在這些條件下形成的GSDMD-N30可能低于抗體的檢測(cè)閾值，和/或可能不足以引起可觀察到的碘化丙啶（PI）內(nèi)流，但仍能導(dǎo)致膜孔隙的形成。然而，在Gsdmd^-/- BLaER1 Mos或經(jīng)GSDMD抑制劑二硫侖處理的原代Mos中，mIL-1b 的分泌未受到影響。這些發(fā)現(xiàn)說明mIL-1b在Mos細(xì)胞中對(duì)Mito⁺ RBCs和poly I:C的反應(yīng)獨(dú)立于GSDMD。正如預(yù)期的那樣，Mito⁺ RBC刺激的iPSC Mos以NLRP3/Casp1依賴的方式釋放mIL-1b，MxA缺陷既不影響iPSC Mos的分化，也不改變NLRP3的表達(dá)。然而，用Mito⁺ RBCs激活Mxa^-/- iPSC Mos會(huì)導(dǎo)致mIL-1b釋放受損，進(jìn)一步支持MxA參與人類原代Mos中非傳統(tǒng)的mIL-1b分泌。（見圖5）

蛋白酶K（PK）保護(hù)實(shí)驗(yàn)表明，MxA位于表面，而mIL-1b位于亞細(xì)胞膜的腔內(nèi)。MxA缺陷減少了膜相關(guān)的mIL-1b，并且在Mxa^-/- BLaER1 Mos膜中檢測(cè)到的殘留mIL-1b不能免受PK消化的影響。通過基于蛋白脂質(zhì)體（PtLp）的運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)，PtLp膜中MxA的存在保護(hù)了約50%的mIL-1b免受蛋白酶消化影響。研究者檢測(cè)了MxA和mIL-1b的分布情況，發(fā)現(xiàn)MxA和 mIL-1b與高爾基體網(wǎng)絡(luò)（TGN）一致。免疫熒光（IF）分析顯示，MxA和mIL-1b共定位在這個(gè)亞細(xì)胞區(qū)室中。這些發(fā)現(xiàn)支持了MxA在促進(jìn)mIL-1b向高爾基體轉(zhuǎn)位以積極推動(dòng)其非常規(guī)分泌方面的作用。（見圖6）

總的來(lái)說，這些研究表明，在SLE 患者的血液中，存在攜帶紅細(xì)胞、表達(dá)誘導(dǎo)ISGs并準(zhǔn)備釋放mIL-1b 的Mos，mIL-1b 的分泌是通過一種不依賴于GSDMD 和細(xì)胞焦亡的方式進(jìn)行的，而是依賴于IFN 誘導(dǎo)蛋白MxA，這為治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡提供一種新的潛在靶點(diǎn)。

云克隆開發(fā)了上述研究中涉及的相關(guān)指標(biāo)的蛋白、抗體、ELISA試劑盒等產(chǎn)品以助力相關(guān)研究，部分指標(biāo)節(jié)選如下，供參考：