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單抗還是多抗?多肽還是重組蛋白?
我們收到這樣一個定制抗體的訂單詢問,我要定制一個針對小鼠Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG)某一段序列的抗體,這段序列包含35-55位氨基酸,那么我是需要單克隆抗體好還是多克隆抗體好?制備抗體的時候是用多肽作為免疫原好還是用重組蛋白作為免疫原好呢?首先,我們來看看單克隆抗體和多克隆抗體的主要區(qū)別在哪里呢?單克隆抗體是針對單一抗原決定簇,來自單個B淋巴細胞克隆的抗體,多克隆抗體是針對多個抗原決定簇,由多個B淋巴細胞克隆所產生的抗體。通常來說一個含有多個抗原決定簇的大分子免疫原進入機體后,其不同......
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常見免疫檢測的抗體標記種類
標記抗體是免疫電鏡樣品制備的一種常見方法,該技術由于操作簡單、靈敏度高,常應用于IHC,WB,ICC,ELISA等實驗。通過標記物的增強放大效應來定位分析抗原,是目前市面上理想的快速價廉的定量檢測方法??贵w標記主要有酶標記、熒光素標記、同位素標記、生物素標記等,還有一些其他的標記方法例如膠體金標記,下面具體來展示云克隆公司研發(fā)的抗體標記種類:1、辣根過氧化物酶(HRP)標記,HRP標記單抗和多抗的常用方法是過碘酸鈉法。其原理是HRP的糖基被氧化成醛基,隨后與抗體蛋白的氨基結合,形成Schiff堿。常用的HRP的底物有鄰苯......
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APOB家族及其受體的檢測
人體APOB由APOB基因進行編碼,血漿中極低密度脂蛋白(VLDL ),中間密度脂蛋白(IDL)中均含有APOB。APOB的水平變化與脂質代謝,動脈粥樣硬化等腦血管等疾病密切相關,是目前臨床研究的熱點。APOB在LDL中發(fā)揮作用的機理功能尚待研究。血漿中APOB以APOB48和APOB100這兩種形式存在,其中APOB48主要在小腸中合成,而APOB100主要在肝臟中合成。APOB100是APOB群中最大的蛋白,通常提到的APOB實際上指的就是APOB100,它有4563個氨基酸。APOB48與APOB100有共同的N端結構,它是由編碼APOB100的基因序列在第2153個氨基酸處產生了終止密碼子而編碼......
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免疫組織化學原理圖
免疫組織化學又稱免疫細胞化學,是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應,對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。原理圖如下:最常選用的免疫學檢測方案之一。免疫組化實驗中抗原修復方法的選擇,抗體工作濃度的確定和染色方案等步驟都是決定實驗成敗與否的關鍵。許多實驗人員面對繁瑣的實驗步驟,往往得到了不盡如人意的結果。在此,提前告訴大家一個好消息,Cloud-clone. Corp已開展免疫組化代測服務?。?!具體情況,會在下一次的專題中公布,敬請期待!更多信息,請查閱htt......
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重組蛋白的詳細構建方法
應用重組DNA將目標基因進行表達得到的蛋白質成為重組蛋白,重組蛋白在生物信號傳導過程,藥物研發(fā),科學研究中扮演著重要角色。下面來介紹一下重組蛋白的生產工藝流程。1.基因擴增(1)引物合成搜索目標蛋白基因信息,結合蛋白的結構信息,選取片段或全長設計引物。注意避開跨膜區(qū),以及復雜的二級結構,優(yōu)選N端或C端,引物評分盡可能高,并搜索出核酸序列的酶切位點,使用載體等信息。經研發(fā)部根據研發(fā)經驗提出修改意見最終定稿后交由第三方公司進行引物合成。(2)基因克隆機重組鑒定1)PCR根據目的蛋白特異性表達組織,選取特異......
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雙抗夾心法CLIA檢測原理
雙抗夾心化學發(fā)光法(CLIA)是將雙抗體夾心法與化學發(fā)光檢測技術結合在一起的檢測方法。它的一般實驗步驟包括:將特異性針對待測抗原的抗體包被于 96 孔微孔板中,制成固相載體;向微孔中分別加入標準品或標本,使待測抗原與連接于固相載體上的抗體結合;此后加入生物素化的針對待測抗原的抗體,形成夾心;再將未結合的生物素化抗體洗凈后,加入 HRP 標記的親和素,再次徹底洗滌后加入魯米諾發(fā)光底物,并用光子計數器,讀出各孔的相對光度值(RLU)。此法與雙抗夾心ELISA法的區(qū)別在于采用了增強型的ECL發(fā)光體系作為發(fā)光底物試劑來實......
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免疫組織化學樣本處理I
免疫組織化學用于觀察標本的染色結果對靶抗原抗體進行鑒定和定位,其標本制備非常重要。在制作標本過程中,需保持抗原的完整性,在染色、洗滌包埋等過程中避免發(fā)生溶解和變性,同時防止擴散至鄰近細胞或組織間隙中。圖1. IHC結果示意圖組織材料的處理是獲得良好免疫組織化學結果的前提,活體組織,各種體液及穿刺液和細胞都可以用于免疫組化分析,針對不同的標本類型可以選擇不同的制備方法?;铙w組織常選用石蠟切片和冰凍切片處理,而體液、穿刺液及細胞樣本則選用涂片方式處理。對于細菌菌落或尸體病變組織,可將新鮮切面壓印于玻......
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單克隆抗體的詳細制備方法
自Kohler和Milstein建立了淋巴細胞雜交瘤技術后,他們將只針對一種抗原決定簇產生抗體B淋巴細胞和能無限增殖的腫瘤細胞融合雜交,產生既能分泌抗體,又能無限增殖的雜交融合細胞,它所產生的抗體是針對同一抗原決定簇的高度同質的抗體,即單克隆抗體(monoclonal antibody),簡稱單抗。與多抗相比,單抗純度高,專一性強、重復性好、且能持續(xù)地無限量供應。單抗技術的問世,不僅帶來了免疫學領域里的一次革命,而且它在生物醫(yī)學科學的各個領域獲得極廣泛的應用,促進了眾多學科的發(fā)展。單克隆抗體制備的基本過程如下:(1)用抗原......