眾所周知，在基因工程領(lǐng)域，常用的表達(dá)系統(tǒng)共有三種，包括：原核表達(dá)系統(tǒng) (大腸桿菌 E. coli 表達(dá)系統(tǒng))、酵母表達(dá)系統(tǒng)(P. Pichia 表達(dá)系統(tǒng))和哺乳動物細(xì)胞表 達(dá)系統(tǒng)。原核表達(dá)系統(tǒng)由于操作簡單、成本低廉、表達(dá)效率高等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用 于外源基因的蛋白表達(dá)。但同時，原核表達(dá)體系也有一些自身的缺點，比如容易形 成包涵體，不能進(jìn)行翻譯后加工等等。為了盡量避免原核表達(dá)系統(tǒng)自身的不足，Cloud-Clone Corp.又另外開發(fā)建立了 酵母表達(dá)平臺。酵母表達(dá)外源基因具有一定的翻譯后加工能力，收獲的外源蛋白質(zhì) 具有一定程度上的折疊加工......

ELISA 試劑盒（簡稱試劑盒）的穩(wěn)定性是指試劑盒在生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定界限內(nèi)保 持其特性的能力。根據(jù)實驗的目的和條件不同，穩(wěn)定性試驗可分為加速穩(wěn)定性試驗 和長期試驗。加速穩(wěn)定性試驗，通常在 37 度下進(jìn)行，用于加快試劑盒中的生物試劑的化學(xué) 或物理變化速度考察試劑盒的穩(wěn)定性?？蓪υ噭┖性谶\輸、保存過程中可能會遇到 的短暫的超常條件下的穩(wěn)定性進(jìn)行模擬考察，并初步預(yù)測試劑盒在規(guī)定的儲存條件 下長時間的穩(wěn)定性。取有效期內(nèi)的試劑盒，在 37 度分別破壞 24 小時和 72 小時，檢測試劑盒的回 收率、線性和精密度，判斷試劑盒的有效性......

通常意義上來說，小分子是指分子量很小的化合物，一般分子量小于 1000 道爾頓（Dalton，Da）。在生物學(xué)領(lǐng)域，常見的小分子包括：多肽、多糖、氨基 酸、核苷酸等；其中也包括食品安全中涉及的“瘦肉精”、“三聚氰胺”等； 以及醫(yī)學(xué)檢測中的激素等。由于小分子通?；瘜W(xué)組分單一，化學(xué)結(jié)構(gòu)簡單且分子量小，所以不具備免 疫原的基本化學(xué)特性。因此，小分子直接免疫動物是不能激發(fā)免疫應(yīng)答而獲得 特異性抗體的，常用的免疫學(xué)檢測方法也很難對其進(jìn)行定量檢測?，F(xiàn)有的針對 小分子定量檢測的方法主要為高效液相色譜法......

眾所周知，對于具有多個表位的抗原而言，雙夾心 ELISA（Double Sandwich ELISA）可應(yīng)用于目標(biāo)抗原或抗體的定量檢測。而對于小分子抗原或半抗原，因缺 乏可作夾心法的兩個以上的結(jié)合位點，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定。此時， 可以采用競爭抑制法模式來檢測其中靶分子的含量。競爭抑制 ELISA 又叫封閉 ELISA，其主要原理是將標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合。 標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，最后的顯色也愈淺，也就 是說，最終顯色的結(jié)果與待檢抗原或抗體的干擾程度成負(fù)相關(guān)。小分子激素......

蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）是根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理檢測復(fù)雜樣本 中的某種蛋白的方法。將混合抗原樣本在凝膠板上進(jìn)行單向或雙向電泳，經(jīng)過 PAGE 分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白 質(zhì)，且能保持電泳分離的類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽 作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與或標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯 色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)廣泛應(yīng) 用于鑒定蛋白以及對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。蛋白質(zhì)印跡分為蛋白質(zhì)......

Elisa 是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對于 Elisa 實驗的成功有著舉足輕重的作用。利用 ELISA 進(jìn)行檢測的樣本類型包括常 見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的 皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精 液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到 Elisa 實 驗的結(jié)果。下面我們就常見的樣本處理方法，供研究者參考。1、 血液樣本血液采取后應(yīng)盡快進(jìn)行處理，使血清（漿）從與血細(xì)胞接觸的全血中分離 出來。血清與......

ELISA 實驗中，實驗者經(jīng)常會遇到樣本測值低的問題，樣本類型包括血清、 血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液等。假設(shè)客戶的操作完全正確，標(biāo)準(zhǔn)曲線良好， 這種情況樣本測值低可從兩方面進(jìn)行分析：一是樣本本身含量可被檢測，但由 于實驗操作等原因?qū)е聵颖緶y值不在試劑盒檢測范圍內(nèi)；二是分析物在樣品中 本身濃度偏低。下面將從這兩個方面來進(jìn)行分析導(dǎo)致樣本測值低的因素以及對 應(yīng)的解決方案。1.樣本本身含量可以被檢測，有哪些原因?qū)е聹y值低呢？1）試劑盒的保存試劑盒要按照規(guī)定的方法保存，實驗者在購買試劑盒時請務(wù)必留心試劑盒 不同組......

自上世紀(jì) 70 年代問世以來，酶聯(lián)免疫吸附測定作為一種簡便、快速的微量 蛋白的定量測定方法，已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的許多領(lǐng)域。酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA, Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay）是將 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記結(jié)合的一種新型的免疫測定技術(shù) 。 其可分為以下四大類：直接 ELISA、間接 ELISA、夾心 ELISA 和競爭抑制 ELISA。 而其中，最廣泛用于目標(biāo)抗原或抗體的定量檢測方法就是雙夾心 ELISA（Double Sandwich ELISA），其通過將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，通過待測 抗原與包被抗體反應(yīng)......