隨著抗生素在臨床中使用地越來越廣泛，加上新的病毒如SARS，H7N9等的發(fā)現(xiàn)，新的問題也隨之而來。由于部分患者臨床病情隱匿或不典型，并且受到醫(yī)生個(gè)體臨床思維及經(jīng)驗(yàn)局限的影響，癥狀相似疾病的確診往往也變得困難起來。特別是對(duì)于細(xì)菌性感染和非細(xì)菌性感染，其治療手段完全不同，一旦出現(xiàn)誤診，有可能會(huì)造成錯(cuò)過最佳診療時(shí)間，導(dǎo)致病情惡化等嚴(yán)重后果。因此，我們?cè)谂R床上應(yīng)該如何判斷患者到底是細(xì)菌性感染還是非細(xì)菌性感染呢？實(shí)驗(yàn)人員在研究中發(fā)現(xiàn)，PCT（降鈣素原，procalcitonin）是一種非常特殊的蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)如圖1所示當(dāng)嚴(yán)......

免疫組織化學(xué)技術(shù)又稱免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，是指用標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的一項(xiàng)免疫檢測(cè)方法。它把免疫反應(yīng)的特異性、組織化學(xué)的可見性和分子生物技術(shù)的敏感性等巧妙結(jié)合，借助顯微鏡的顯像和放大作用，在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平檢測(cè)各種抗原物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、多肽、酶、激素、病原體以及受體等），是單一的靜止的形態(tài)學(xué)描述，上升到結(jié)構(gòu)、功能和代謝為一體的動(dòng)態(tài)觀察，為疾病的診斷、鑒別診斷和發(fā)病機(jī)制的研究提供了強(qiáng)有力的手段。然而，要想得到一張高質(zhì)......

多克隆抗體（polyclonal antibody, pAb）是指用含有多個(gè)抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物后刺激機(jī)體多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的不同抗體，得到的免疫血清含有多種抗體。多克隆抗體可應(yīng)用于WB、IHC、Elisa、IP等實(shí)驗(yàn)中，是生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域不可或缺的研究伙伴。下面我們會(huì)來介紹一下多克隆抗體的制備過程。1.免疫原的制備普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原......

競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA法是指將特異性抗體吸附于固相載體，隨后加入待測(cè)抗原（標(biāo)準(zhǔn)品和樣本）和一定量的生物素標(biāo)記的抗原（檢測(cè)液A），使二者競(jìng)爭(zhēng)與固 相抗體結(jié)合，溫育后經(jīng)洗滌去掉未結(jié)合物，然后加入HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過溫育和徹底洗滌后加入底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。待測(cè)標(biāo)本濃度越高，標(biāo)記抗原和抗體的結(jié)合就越受到抑制，顯色愈淺。顯色的深淺與酶量呈正相關(guān)，而與樣品中待測(cè)物質(zhì)含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（O.D.值），計(jì)算樣品濃度。由于生物大分......

分子克隆構(gòu)建載體的最終目的是能夠?qū)⒛康牡鞍妆磉_(dá)出來，常見的表達(dá)系 統(tǒng)有大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，酵母表達(dá)系統(tǒng)，昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，植物表達(dá)系統(tǒng)以 及哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)具有遺傳背景清楚、操作簡(jiǎn)單、 產(chǎn)量高、價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)，是最常用的蛋白表達(dá)系統(tǒng)之一。重組蛋白的分離純化 是蛋白，抗體，Elisa 試劑盒研發(fā)與制備的基礎(chǔ)。常見的純化方法有離子交換層 析，親和層析，疏水作用層析，排阻層析，電泳等，但純化工作不僅要保證純 度，重復(fù)性，還要保證穩(wěn)定性并控制成本。以下將以 E.coli 表達(dá)的重組蛋白為例， 給大家......

雙抗夾心 ELISA 法是指將特異性針對(duì)待測(cè)抗原的抗體包被于 96 孔微孔板 中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中待測(cè)抗原與連接于 固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入生物素化的針對(duì)待測(cè)抗原的抗體，形成夾心， 將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后，加入 HRP 標(biāo)記的親和素，再次徹底洗滌后加 入 TMB 底物顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下 轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)抗原呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(O.D.值)，用于樣本中待測(cè)抗原濃度測(cè)算。原理圖如下：

細(xì)胞凋亡，亦稱細(xì)胞程序性死亡，是細(xì)胞在一系列內(nèi)源性基因的調(diào)控下發(fā) 生的自然或生理性死亡的過程。細(xì)胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細(xì)胞死亡形 式，根據(jù)死亡細(xì)胞在形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)上的差別，可以將二者區(qū) 別開來。傳統(tǒng)的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法有很多種，主要包括：1. 細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè)，包括直接用光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯 微鏡、共聚焦激光掃描顯微鏡或透射電子顯微鏡等觀察是否有凋亡小體；2. 磷脂酰絲氨酸外翻分析（AnnexinV 法），包括用標(biāo)記了的 Annexin-V 作 為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡來......

Elisa 是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對(duì)于 Elisa 實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用。樣本收集的時(shí)間、處理方法和保存都會(huì) 影響到 Elisa 實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。上節(jié)我們介紹了血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì) 胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等常見樣本的處理方法，這一節(jié)我們將會(huì)介紹皮膚組 織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰 道分泌物等特殊樣本的處理方法，供研究者參考。1、痰液1）選擇痰液中較為粘稠部分稱重，加兩倍于痰量的 0.1% DTT(二硫蘇糖醇)， DTT 的主要作用是溶解粘液，......