-
肌酸激酶B（CK-BB）活性蛋白
查看詳情實驗原理：肌酸激酶BB(CK-BB)是一種肌酸激酶。CK-BB由兩個完全相同的腦型CKB亞單位組成的同二聚體，是一種參與細(xì)胞能量穩(wěn)態(tài)的細(xì)胞質(zhì)酶，其某些部分與細(xì)胞膜、ATP酶和細(xì)胞內(nèi)多種需要ATP的酶結(jié)合。此外，肌酸激酶M(CKM)已被鑒定為CKB的相互作用因子。本實驗通過結(jié)合ELISA檢測重組人CK-BB和重組人CKM的相互作用。實驗試劑：APC030Hu01 Active Creatine Kinase B (CK-BB)實驗方法：用含有0.01% BSA的PBS（pH 7.4）梯度稀釋CK-BB。將100μL樣品移入CKM蛋白預(yù)包被酶標(biāo)板中，37℃孵育2小時。棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗滌。除去洗液，加入抗CK-BB......
-
過敏毒素C5a活性蛋白
查看詳情過敏毒素C5a是補體系統(tǒng)的組成部分，能夠促進中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞向血管壁的遷移及粘附。C5a可誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞趨化遷移。因此，采用24孔細(xì)胞遷移/趨化分析系統(tǒng)，檢測C5a對人單核細(xì)胞株THP-1的趨化作用。實驗步驟：將THP-1細(xì)胞接種到趨化小室的上室（100μL細(xì)胞懸浮液，10^6個細(xì)胞/mL重置于含有0.5%FBS的RPMI 1640中），將重組過敏毒素C5a（用無血清RPMI 1640分別稀釋至50ng/mL和100ng/mL）加入趨化小室的下室。上室和下室使用聚碳酸酯過濾器（8μm孔徑）分隔。由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，從而......
-
鐵調(diào)素（Hepc）活性蛋白
查看詳情鐵調(diào)素（Hepcidin，Hepc）是鐵代謝的調(diào)節(jié)因子。Hepcidin通過與位于腸道腸上皮細(xì)胞基底外側(cè)表面和網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞（巨噬細(xì)胞）質(zhì)膜上的膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白（ferroportin，F(xiàn)PN）結(jié)合來抑制鐵離子的轉(zhuǎn)運。Hepc最終分解溶酶體中的轉(zhuǎn)運蛋白，抑制FPN而阻止鐵離子的輸出，鐵離子被隔離在細(xì)胞中。實驗?zāi)康腇PN已被鑒定為Hepc的相互作用因子，因此采用結(jié)合ELISA法檢測重組人Hepc與重組人FPN的相互作用。實驗步驟：用含有0.01%BSA的PBS（pH 7.4）梯度稀釋Hepc。將100uL樣本移入FPN蛋白預(yù)包被的酶標(biāo)板中，37℃反應(yīng)2小時。棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。加......
-
活性蛋白單核細(xì)胞趨化蛋白1的趨化作用
查看詳情單核細(xì)胞趨化蛋白1（Active Monocyte Chemotactic Protein 1，MCP-1），也稱為CCL2，屬于趨化細(xì)胞因子家族。MCP-1已被證明能夠誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞的趨化性遷移。因此，本實驗采用趨化性試驗檢測其MCP-1蛋白對THP-1細(xì)胞的趨化作用。將100uL THP-1細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)小室上室，不同濃度的MCP-1蛋白（25 ng/mL和50 ng/mL）置于培養(yǎng)小室下室，37℃孵育3h，去除濾膜并在倒置顯微鏡下觀察并計數(shù)細(xì)胞遷移數(shù)。顯微鏡下觀察遷移的THP-1細(xì)胞如下圖：圖1. MCP-1對THP-1細(xì)胞的趨化作用A.50ng/mL MCP-1蛋白對THP-1細(xì)胞的趨化作用；B.25ng/mL MCP-1蛋白......
-
活性蛋白巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β的促趨化作用
查看詳情巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β（Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta, MIP-1β），又稱CCL4，主要與CCR5受體特異性結(jié)合的趨化因子，能特異性趨化淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞向炎癥部位遷移。本實驗通過檢測MIP-1β對人急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞系Jurkat的趨化作用來評估人重組MIP-1β蛋白的活性。實驗方案：將100uLJurkat細(xì)胞懸液（5×105cells/mL in RPMI 1640 with FBSfree）鋪板與培養(yǎng)小室上室，不同濃度的人重組MIP-1β蛋白（0.0001ng/mL, 0.001ng/mL, 0.1ng/mL, 1ng/mL, 10ng/mL, 100ng/mL diluted separately in serum free RPMI 1640）置于培養(yǎng)小室下......
-
活性蛋白IL2的促細(xì)胞增殖作用
查看詳情白介素2（IL2）的產(chǎn)生主要由T細(xì)胞受抗原或絲裂原刺激后合成，IL2在調(diào)節(jié)T細(xì)胞和B細(xì)胞的增殖中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。人IL2和小鼠IL2氨基酸序列的同源性是56%，提示其可能存在交叉性。因此，為了檢測人重組蛋白IL2的生物學(xué)活性，我們選用小鼠CTLL-2細(xì)胞來進行細(xì)胞的增殖實驗。實驗方案：將CTLL-2細(xì)胞以5000個細(xì)胞每孔的細(xì)胞密度接種到96孔板中，并添加不同濃度的人重組IL2蛋白。孵育48h后，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞，用CCK-8細(xì)胞計數(shù)試劑盒（cell Counting Kit-8）檢測細(xì)胞增殖情況。實驗結(jié)果： ......
-
淺談大鼠心肌細(xì)胞原代細(xì)胞的制備
查看詳情心肌細(xì)胞培養(yǎng)作為一種體外研究模型，可以更便捷的從細(xì)胞和分子水平對其生長、發(fā)育、生理、代謝、病理等進行研究。在許多研究領(lǐng)域原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞作為一種主要的研究模型，被廣泛應(yīng)用于心血管研究之中。武漢云克隆動物有限公司憑借多年的實踐經(jīng)驗總結(jié)了一些大鼠心肌原代細(xì)胞的處理方法，給大家分享：1 大鼠的選擇新生大鼠鼠齡的選擇新生大鼠心肌細(xì)胞在出生后3 d內(nèi)具有部分的增殖能力，成年大鼠心肌細(xì)胞則為終末分化細(xì)胞，不再具有分裂增殖能力。因此，大鼠出生時間越短，其心肌細(xì)胞分離后成活率越高，越容易貼壁生長。大量觀測表明......
-
基質(zhì)金屬蛋白酶13活性實驗
查看詳情基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix Metalloproteinase）是一組具有多種共同生化性質(zhì)的可以降解細(xì)胞外基質(zhì)的酶，它們參與正常生命過程中結(jié)締組織的再造?；|(zhì)金屬蛋白酶的降解作用在中性pH條件進行，需要有內(nèi)在的Zn2+離子和外在的Ca2+離子存在；且酶活能被螯合劑和金屬蛋白酶的組織抑制因子（Tissue Inhinbitor of Metalloproteinase，TIMP）所抑制。 基質(zhì)金屬蛋白酶13（MMP13）是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的成員，研究表明MMP13參與與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的聚集蛋白聚糖降解，骨關(guān)節(jié)炎軟骨移植物中II型膠原蛋白的裂解，以及腫瘤的進展和轉(zhuǎn)移。另外，MMP1......