蛋白活性實驗-TNF-a活性蛋白TNF-a是內(nèi)源性的熱原，能夠引起發(fā)熱、凋亡細胞死亡、炎癥和抑制腫瘤發(fā)生。據(jù)報道，TNF-a可以抑制A549細胞的增殖和誘導(dǎo)凋亡，在刺激后細胞上清液中IL-1的濃度會增加。實驗方法：因此,A549細胞在DMEM孵化TNFa(1 ng / mL,10 ng / mL)2 h,4 h,8 h,24小時、48小時,然后細胞被倒置顯微鏡觀察,IL-1β被ELISA檢測細胞上清液中。實驗結(jié)果：用TNF-a (10ng/mL)孵育72h后觀察細胞凋亡(見圖一）。A BFigure 1. Effect of TNF-aon A549 cells.(A)A549 cells cultured in DMEM, stimulated with 10ng/mL TNF-afor 72h; (B......

蛋白活性實驗-CD14活性蛋白CD14作為一種共受體(連同toll樣受體TLR 4和MD-2)用于檢測細菌脂多糖(LPS)。CD14只能在脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)存在的情況下結(jié)合LPS。雖然LPS被認為是其主要的配體，但CD14也能識別其他的與病原體相關(guān)的分子模式，如lipoteichoic acid。此外，脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)已被鑒定為CD14的中間體，因此進行了ELISA結(jié)合檢測，以檢測重組人CD14和重組人LBP的相互作用?；钚詫嶒灒河煤?.01%的BSA 的PBS (PH7.4)稀釋CD14。將100μl樣本轉(zhuǎn)移到LBP預(yù)包被板中37℃孵育2 h。用抗CD14多抗孵育1小時后用PBST沖洗，，然后吹吸，沖洗3......

免疫組織化學(xué)用于觀察標(biāo)本的染色結(jié)果對靶抗原抗體進行鑒定和定位，其標(biāo)本制備非常重要。在制作標(biāo)本過程中，需保持抗原的完整性，在染色、洗滌包埋等過程中避免發(fā)生溶解和變性，同時防止擴散至鄰近細胞或組織間隙中。組織材料的處理是獲得良好免疫組織化學(xué)結(jié)果的前提，活體組織，各種體液及穿刺液和細胞都可以用于免疫組化分析，針對不同的標(biāo)本類型可以選擇不同的制備方法?；铙w組織常選用石蠟切片和冰凍切片處理，而體液、穿刺液及細胞樣本則選用涂片方式處理。對于細菌菌落或尸體病變組織，可將新鮮切面壓印于玻片上做成印片。我們......

1.烘片：60℃烘片0.5-2小時。2.脫蠟水化：烘片結(jié)束后，石蠟切片依次置于以下試劑中：1）二甲苯I：30 min2）二甲苯II：30 min3）100%乙醇：10 min4）95%乙醇：10 min5）80%乙醇：10 min6）70%乙醇：10 min7）自來水沖洗10 min3.抗原修復(fù)-微波爐抗原熱修復(fù)法（可選）：將組織切片轉(zhuǎn)移到沸騰的EDTA-Tris 溶液中使其完全浸透。低火加熱1min，停止加熱并靜置于微波爐中10min。然后再低火加熱3-4min，停止加熱，使EDTA-Tris 溶液在室溫自然冷卻。4.PBST漂洗3次：去除殘留并浸泡在PBST中，在搖床中以40 RPM漂洗5 min，重復(fù)3次。5.阻斷內(nèi)源過......

1)雙擊看圖軟件“CaseViewer_2.1__RTM_v2.1.2.69595”，按照提示進行安裝；2）安裝結(jié)束后會出現(xiàn)三個快捷方式，均要保留（不能刪除）；3）雙擊綠色圖標(biāo)"CaseViewer"快捷方式，出現(xiàn)一個界面，然后點擊“Local computer”；4）找到“computer”通過路徑找到目標(biāo)切片，雙擊即可看見圖片，通過滾動鼠標(biāo)中間的滑輪來調(diào)整圖片放大倍數(shù)，然后點擊即可截取屏幕所顯示的圖片。

酶聯(lián)免疫吸附測定實驗（ELISA)-特殊樣本處理方法之前的專題中我們給大家介紹了常規(guī)樣本諸如血清，血漿，組織細胞等的處理方法。這一次我們再跟大家普及一些在ELISA檢測中碰到特殊樣本的處理方式。v痰液選擇痰液中較為粘稠部分稱重，加兩倍于痰量的0.1%DTT(二硫蘇糖醇)37攝氏度恒溫水浴振蕩5分鐘，再加入兩倍于痰量的PBS緩沖液繼續(xù)振蕩15-20分鐘，150目的金屬絲網(wǎng)過濾，1,000×g離心10分鐘吸取上清液-20oC或-80oC冷凍保存。v肺泡灌洗液1,000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20oC或-80oC保存，但應(yīng)避免反復(fù)......

活性人白介素6（IL6）白細胞介素6 (IL-6)是一種白細胞介素，它既是一種促炎細胞因子，又是一種抗炎的肌氨酸。目前的數(shù)據(jù)表明IL-6可通過Jak / Stat3通路直接應(yīng)用于雌激素受體陽性的乳腺癌細胞增殖抑制實驗?；钚詫嶒灒罕緦嶒炛荚跈z測IL-6對雌激素受體陽性MCF-7細胞的增殖具有抑制作用。細胞接種于96孔板，密度5000細胞/孔，重復(fù)3孔,過夜,然后用無血清DMEM中替換培養(yǎng)基中豐富的IL-6。孵育96h后，通過倒置顯微鏡觀察細胞，細胞計數(shù)由CCK-8試劑盒測定。簡要來說就是，每孔加入10μl CCK-8溶液,然后37°C孵育1 - 4小時，取上清進行450 nm處......

1.固定：去除殘留液體，用1X PBST清洗接種在干凈玻片上的細胞3次，每次3min。在室溫下用新鮮配制的4%多聚甲醛固定15min。2.1XPBST漂洗三次：去除固定液，1XPBST漂洗3次，每次5min。3.透化：在1XPBST中加0.1% Triton X-100，孵育20分鐘以提高通透性。4.1XPBST漂洗三次：去除殘留液體，1XPBST漂洗3次，每次5min。5.封閉：去除殘留液體，在切片上加5% BSA或血清。確保血清與二抗來源于相同物種。然后在室溫下孵育20min。6.孵育一抗：去除殘留液體，用適當(dāng)稀釋比例的一抗覆蓋組織部位，4oC過夜孵育。7.復(fù)溫：將切片從4oC移至室溫靜置約2......