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巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)與巨噬細胞集落刺激因子受體(M-CSF-R)的結(jié)合活性檢測
巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF),也稱為CSF-1,是一種分泌型細胞因子,它可以影響造血干細胞分化為巨噬細胞或其他相關(guān)細胞。 M-CSF是造血生長因子,參與單核細胞,巨噬細胞和骨髓祖細胞的增殖,分化和存活。它還通過吞噬和趨化活性影響巨噬細胞和單核細胞,并增加了腫瘤細胞的細胞毒性。M-CSF的作用不僅限于單核細胞/巨噬細胞,通過與膜受體相互作用(C-fms編碼的CSF1R或M-CSF-R原癌基因),M-CSF還可以調(diào)節(jié)早期造血細胞的增殖,并影響多種免疫、新陳代謝、生育能力和懷孕相關(guān)的生理過程。此外,巨噬細胞集落刺激因子受體(M-CSF-R......
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骨橋素活性蛋白誘導(dǎo)促炎趨化因子MCP-1的高表達
骨橋素(Osteopontin,OPN),是一種多功能磷酸化糖蛋白,在中性粒細胞的募集中發(fā)揮有重要的作用,并可誘導(dǎo)促炎趨化因子的表達,如:MCP-1,MIP-1β。據(jù)報道,在乳腺癌細胞系MCF-7中,OPN可通過NF-kappa B信號通路誘導(dǎo)MCP-1的高表達。實驗?zāi)康模河^察在MCF-7細胞系中,OPN蛋白是否能誘導(dǎo)MCP-1高表達來驗證OPN蛋白的活性。實驗步驟:1.將MCF-7細胞以細胞密度1x105/ml過夜培養(yǎng);2.分別以100ng/ml,200ng/ml的OPN蛋白與MCF-7細胞共培養(yǎng)24h;3.ELISA檢測細胞上清中MCP-1的含量。實驗結(jié)果:實驗結(jié)論:克隆OPN活性蛋白可誘導(dǎo)MCF-7細胞上清中......
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IGF1活性蛋白的促細胞增殖作用
胰島素樣生長因子1(IGF1),又稱生長調(diào)節(jié)素C,是一種在分子結(jié)構(gòu)上類似于胰島素但其促生長活性更強于胰島素的低分子肽。據(jù)報道,IGF1能誘導(dǎo)多種細胞的增殖、遷移和分化,其中包括人乳腺癌細胞系MCF7。本實驗通過觀察IGF1活性蛋白對MCF7細胞系的促增殖作用來評估IGF1蛋白的活性。實驗方案:1.將MCF-7細胞接種到96孔板中,接種3復(fù)孔,調(diào)整每孔細胞數(shù)2000個,培養(yǎng)過夜待細胞貼壁;2.更換為無血清的DMEM培養(yǎng)基,并加入不同濃度的IGF1蛋白,培養(yǎng)72小時;3.在倒置顯微鏡下觀察細胞增殖的情況,并用CCK-8試劑盒進行細胞增殖的檢測(每孔加......
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活性蛋白—腫瘤壞死因子β(TNFb)活性蛋白
TNF-β是腫瘤壞死因子家族成員之一,是一種對多種腫瘤細胞具有細胞毒作用的強淋巴因子。TNF-β與TNF-α在分子結(jié)構(gòu)和受體的相似性,決定了這兩個分子具有非常相似的生物學(xué)效應(yīng)。根據(jù)報道,TNF-α可抑制A549細胞增殖和誘導(dǎo)凋亡,刺激后細胞上清液中IL-1β濃度升高。實驗證明,TNF-β也具有類似生物活性。實驗方法:將A549細胞與TNF-β(10ng/mL)混合培養(yǎng)8h、24h、48h、72h后,分別用倒置顯微鏡觀察細胞,ELISA法檢測細胞上清液中IL-1β的含量。結(jié)果1:TNF-β(10ng/mL)作用細胞72h后,細胞凋亡明顯。結(jié)果2:加入TNF-β(10ng/mL),細胞孵育8h......
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活性蛋白—粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)活性蛋白
GM-CSF是一種單體糖蛋白,作為一種細胞因子,可刺激干細胞產(chǎn)生粒細胞(中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞)和單核細胞。眾所周知,人紅系白血病細胞TF-1,白細胞介素3(IL-3)或粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)可促進TF-1細胞增殖。因此,GM-CSF的活性可通過TF-1細胞增殖實驗來測定的。據(jù)報道,GM-CSF也能誘導(dǎo)人單核細胞白血病細胞株U937分化。實驗方案-1TF-1細胞作為待刺激細胞,用不同濃度rhGM-CSF與TF-1細胞在96孔微孔板中培養(yǎng),每天用倒置顯微鏡觀察細胞,用CCK-8細胞計數(shù)試劑盒(cell Counting Kit-8)檢測細胞增......
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MIP1a活性蛋白對THP1細胞的趨化作用
巨噬細胞炎性蛋白1α(Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha, MIP1a),又名趨化因子配體3(CCL3),屬于趨化因子家族。MIP1a參與巨噬細胞、單核細胞和中性粒細胞的聚集及激活。實驗?zāi)康模涸u估MIP1a活性蛋白對單核細胞系THP1的趨化作用。實驗方案:1.將THP1細胞培養(yǎng)在0.5% FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基中;2.用無血清的RPMI 1640培養(yǎng)基將MIP1a活性蛋白稀釋至100ng/mL;3.將100ng/mL的MIP1a活性蛋白加入THP1細胞中;4.在37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)5小時;5.在不同的顯微鏡視野下觀察并計數(shù)細胞遷移的數(shù)量。實驗結(jié)果:A.加入100ng/mL的MIP1a活......
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NGF活性蛋白誘導(dǎo)PC12細胞分化及其結(jié)合活性的驗證
NGF活性蛋白誘導(dǎo)PC12細胞分化實驗實驗原理:神經(jīng)生產(chǎn)因子(Nerve growth factor, NGF)是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)肽,主要參與某些神經(jīng)元的生長發(fā)育、維持、再生長和分化作用。PC12細胞株來源于一種可移植的鼠嗜鉻細胞瘤,該細胞對NGF有可逆的神經(jīng)元顯形反應(yīng),當PC12細胞暴露在NGF,細胞會在一周之內(nèi)作出反應(yīng),主要是停止細胞分裂并延伸神經(jīng)突。實驗方案:PC12細胞培養(yǎng)在含5%胎牛血清和10%馬血清的Ham's F12K培養(yǎng)基中,當細胞到達對數(shù)生長期時,換用含有10ng/ml NGF重組蛋白的新鮮培養(yǎng)基,在倒置顯微鏡下每天觀察細胞的形態(tài)。實......
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IL4活性蛋白誘導(dǎo)THP1細胞的分化實驗
白細胞介素4(IL4)是II型輔助T細胞(Th2細胞)分泌的一種細胞因子。它有很多的生物學(xué)作用,包括:刺激活化B細胞和T細胞增殖;對于B細胞、T細胞、肥大細胞、巨噬細胞和造血細胞均有免疫調(diào)節(jié)作用。實驗原理:體外培養(yǎng)狀態(tài)下,外源性的IL4可誘導(dǎo)THP1細胞分化為樹突狀細胞和巨噬細胞。實驗過程:將THP1細胞置于RPMI-1640培養(yǎng)基中,以2ng/mL IL4進行刺激。7天后,觀察細胞的形態(tài)變化。實驗結(jié)果:7天后,對比細胞的形態(tài)變化,如下:A.以IL4刺激后THP1細胞B.未刺激的THP1細胞實驗結(jié)果:通過觀察細胞的形態(tài)變化,可以發(fā)現(xiàn)用IL4刺激7天后的T......