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蛋白活性實(shí)驗(yàn)-細(xì)胞遷移侵襲實(shí)驗(yàn)
查看詳情細(xì)胞transwell 遷移侵襲實(shí)驗(yàn)方案一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模褐饕糜谮吇蜃蛹易寤蛘吣承┭a(bǔ)體以及某些具有趨化活性的蛋白活性檢測。二、實(shí)驗(yàn)儀器：倒置顯微鏡酶標(biāo)儀 超凈工作臺(tái) CO2培養(yǎng)箱三、相關(guān)試劑、耗材：24孔transwell小室 胎牛血清 DMEM/1640培養(yǎng)基 結(jié)晶紫 基質(zhì)膠 四、實(shí)驗(yàn)步驟：A. 細(xì)胞遷移1 . 將細(xì)胞消化，終止后離心棄去培養(yǎng)液，用 PBS 洗 1-2 遍，用無血清培養(yǎng)基重懸。調(diào)整細(xì)胞密度至 1~5×105左右，每孔100-200μl加入小室上室中。2.下室加入用無血清培養(yǎng)基按5-10倍梯度稀釋的待檢測蛋白，每孔500μl。對(duì)于貼壁細(xì)胞，下室可加入含1-2% ......
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蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）實(shí)驗(yàn)操作流程
查看詳情1.制膠1）試劑濃縮膠緩沖液：1M Tris-HCl, pH 6.8, 0.4% SDS分離膠緩沖液：1.5M Tris-HCl, pH 8.8, 0.4% SDS丙烯酰胺儲(chǔ)存液：29%丙烯酰胺+1.0%亞甲雙丙烯酰胺10%過硫酸銨TEMED(N，N，N‘，N’-四亞甲基乙二胺)電泳緩沖液：0.025M Tris Base, 0.192M Glycine, 0.1% SDS考馬斯亮藍(lán)凝膠染色液：0.2%考馬斯亮藍(lán)R-250，30%甲醇，10%乙酸考馬斯亮藍(lán)凝膠脫色液：30%甲醇，10%乙酸2）設(shè)備微型凝膠裝置：Bio-Rad Mini-Protean 3 Dodeca Cell電源：Bio-Rad PowerPac HC梯度凝膠儀：Bio-Rad Model 485 Gradient Former3）實(shí)驗(yàn)操作在燒杯中按如下......
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酶聯(lián)免疫吸附測定實(shí)驗(yàn)（ELISA)常見樣本處理方法
查看詳情酶聯(lián)免疫吸附測定實(shí)驗(yàn)（ELISA）是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的定量分析方法，樣本的處理對(duì)于ELISA實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用。剛開始接觸ELISA的時(shí)候，會(huì)遇到一些棘手的問題，容易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)這樣那樣的狀況。用于ELISA檢測的常見樣本類型包括血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。這些樣本的收集時(shí)間、處理方法和保存方式都會(huì)影響ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。下面我們將逐一介紹常見的樣本處理方法，供研究者參考。一、血液樣本血液采取后應(yīng)盡快進(jìn)行處理，使血清（漿）從與血細(xì)胞接觸的全血中分離出來。血清與血漿......
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實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)操作流程
查看詳情一、實(shí)驗(yàn)器材及試劑1、實(shí)驗(yàn)器材多樣品研磨珠均質(zhì)儀臺(tái)式高速冷凍型微量離心機(jī)熒光定量PCR儀超凈工作臺(tái)分光光度計(jì)離心管TIP頭2、主要實(shí)驗(yàn)試劑及耗材RNA提取液三氯甲烷異丙醇無水乙醇HyPure TMMolecular Biology Grade WaterRevertAid First Strand cDNA Synthesis KitFastStart Universal SYBR Green Master(Rox)引物75%乙醇：HyPure TMMolecular Biology Grade Water配制離心管、TIP頭均購濕熱滅菌40min，干燥。二、熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟1、總RNA抽提（槍頭和離心管均經(jīng)過濕熱滅菌，無RNA酶）1）取勻漿器，加入1ml的Trizol Reagent，......
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蛋白活性實(shí)驗(yàn)-細(xì)胞增殖/抑制實(shí)驗(yàn)方案
查看詳情細(xì)胞增殖/抑制實(shí)驗(yàn)方案一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^檢測待測蛋白對(duì)某種細(xì)胞的有促進(jìn)增殖或抑制增殖的作用來評(píng)價(jià)該蛋白的生物活性。二、實(shí)驗(yàn)儀器：倒置顯微鏡酶標(biāo)儀 超凈工作臺(tái) CO2培養(yǎng)箱三、相關(guān)試劑、耗材：96孔細(xì)胞培養(yǎng)板 胎牛血清 DMEM/1640培養(yǎng)基 CCK8試劑盒四、實(shí)驗(yàn)步驟：1 .將待測細(xì)胞消化后，用10% DMEM/1640培養(yǎng)基重懸稀釋，按2000-5000 cells/孔接種到96孔板中，每孔100μl?？筛鶕?jù)細(xì)胞自身生長狀態(tài)適當(dāng)調(diào)整接種濃度，抑制實(shí)驗(yàn)可多接種一些。當(dāng)細(xì)胞貼壁后，換無血清的DMEM/1640饑餓過夜。2.將孔內(nèi)無血清培養(yǎng)基吸出棄掉，加入用低濃度......
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免疫層析（膠體金）實(shí)驗(yàn)操作流程
查看詳情1. 膠體金標(biāo)記抗體的制備。將檢測抗體加入到膠體金溶液中，攪拌均勻，靜置0.5-24小時(shí)，逐滴加入牛血清蛋白，攪拌0.5－24h，靜置過夜。離心，棄去上清液。得到膠體金標(biāo)記抗體。2. 噴金。將膠體金標(biāo)記抗體噴在結(jié)合墊上，37oC抽風(fēng)烘干5－24h，得到噴金后的結(jié)合墊。3. 包被C線。C線即是質(zhì)控線，用二抗包被。4. 包被T線。T線是檢測線，用包被抗體包被。37oC抽風(fēng)烘干2－24h, 得到包被后的硝酸纖維素膜，浸泡在封閉液中，37oC抽風(fēng)烘干2－24h。5. 組裝。將聚氯乙烯底板、樣品墊、步驟2.2所得噴金后的結(jié)合墊、步驟3&4處理好的硝酸纖維素膜和......
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雙抗夾心ELISA實(shí)驗(yàn)操作流程
查看詳情1. 酶標(biāo)板包被抗體流程：1.1按說明書推薦的比例稀釋包被抗體，或者設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)用倍比稀釋的方式稀釋包被抗體，酶標(biāo)孔中加100ul包被抗體包被。酶標(biāo)板加上覆膜，4oC溫育過夜或37oC溫育2小時(shí)。1.2棄去孔內(nèi)液體，每孔用350μL的洗滌液洗滌，浸泡1-2分鐘。在吸水紙上輕拍酶標(biāo)板來移除孔內(nèi)所有液體。此過程也可采用噴射瓶，多道移液器 或自動(dòng)洗板機(jī)來完成。1.3每孔加入200ul封閉液封閉，37oC溫育1.5小時(shí)。1.4 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板1次，方法同步驟1.2。酶標(biāo)板包被抗體完成。2. 實(shí)驗(yàn)流程2.1按說明書推薦的方法稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品工作......
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免疫組織化學(xué)石蠟切片實(shí)驗(yàn)操作流程
查看詳情1. 烘片：60℃烘片0.5-2小時(shí)。2. 脫蠟水化：烘片結(jié)束后，石蠟切片依次置于以下試劑中：1）二甲苯I：30 min2）二甲苯II：30 min3）100%乙醇：10 min4）95%乙醇：10 min5）80%乙醇：10 min6）70%乙醇：10 min7）自來水沖洗10 min3. 抗原修復(fù)-微波爐抗原熱修復(fù)法（可選）：將組織切片轉(zhuǎn)移到沸騰的EDTA-Tris 溶液中使其完全浸透。低火加熱一分鐘，停止加熱并靜置于微波爐中10min。然后再低火加熱3-4分鐘，停止加熱，使EDTA-Tris 溶液在室溫自然冷卻。4. PBST漂洗3次：去除殘留并浸泡在PBST中，在搖床中以40 RPM漂洗5 min，重復(fù)3次。5. 阻......